[发明专利]一种PF1022A的分离纯化方法

说明书

一种的分离纯化方法，具体采用溶剂萃取并结合结晶的方法进行分离纯化，本发明的技术方案不需要经过硅胶柱层析，也不用色谱柱（HPLC制备柱）进行分离，与现有技术相比，溶剂用量少，产生的废液少，对环境污染小，同时也降低了生产成本，非常适合工业化生产应用。

技术领域

本发明属于工业微生物技术领域，具体涉及一种PF1022A的分离纯化方法。

背景技术

寄生虫病是目前最为严重的人畜共患病之一，严重影响着畜牧业的健康发展与人类的生命安全。艾默德斯(Emodepside)，是一种环八缩酚酸肽类新型驱虫药物，对动物胃肠道线虫非常有效。当艾默德斯用到线虫，被证明能可抑制寄生线虫的肌肉蠕动，抑制线虫头部运动和咽部运动，除此之外还对其它组织有影响，如抑制产卵。

艾默德斯是PF1022A的半合成衍生物，PF1022A(结构式如式1所示)为半知菌无孢霉(Mycelia sterilia)产生的活性成分，是一个对动物低毒、防治谱广、效果好的驱虫剂。该24元环缩肽化合物最早由Sasaki等人从天然产物中分离得到，之后通过不同的方法进行了人工合成。最近的一系列科学研究表明，PF1022A可以与七螺旋状类latrophilin跨膜受体的氨基位点相结合，该受体分离自捻转血矛线虫(Haemonchus contortus Rudolphi)，其作用是诱导外部钙流入细胞。这种抗线虫药物的作用模式与已知的驱虫剂，如苯并咪唑类、咪唑并噻唑类、大环内酯类的作用机理大不相同。

目前，关于PF1022A提取分离的文献报道极少，中国专利CN1080932A公开了一种通过化学合成的方法制备PF1022A后，用硅胶层析分离纯化的方法。另外两篇专利CN1189159A和CN1232446A公开了采用不同的化学合成方法制备PF1022A后，同样也是通过硅胶层析得到产品的方法。专利CN1046940A公开了采用发酵培养方法制备PF1022A，以及分离纯化方法，其中分离纯化方法主要通过采用混合溶剂进行萃取，上柱HP20树脂进行粗提后，再通过硅胶或凝胶介质进行层析，最后通过高效液相制备柱(ODS柱)进行精制，以得到更高纯度的产品。

现有技术中，大多数纯化方法均需要用到硅胶柱层析或用到色谱柱(如高效液相色谱)分离，工业化生产过程中需要用到大量溶剂，导致大量废液需要处理，环境污染大，生产成本高，长期大量有机溶剂的接触对操作人员的身体健康构成威胁，面对日益提高的市场需求量和产品质量要求，本领域急需找到一种能提高产品收率和纯度的同时，降低生产成本、简化操作步的方法，以满足工业化生产的需求。

发明内容

为达到上述目的，本发明提供了一种环境污染小，纯化方法简单，生产成本低，适合工业化生产的PF1022A的分离纯化方法。

具体，本发明提供了一种PF1022A的分离纯化方法，包括以下步骤：

1)向发酵液中加入助滤剂、搅拌，板框压滤得到菌丝渣；

2)用极性溶剂浸提菌丝渣，过滤，得到浸提液；

3)将浸提液浓缩至无极性溶剂流出，加入萃取溶剂进行萃取；

4)将得到的萃取有机相进行浓缩，得到浓缩浸膏粗品A；

5)将粗品A用极性溶剂结晶得到PF1022A晶体。

其中，步骤1)中所述的助滤剂为珍珠岩或硅藻土；更进一步的优选所述助滤剂的用量为每升发酵液使用30-60g，更优选为每升发酵液使用30-40g助滤剂；

步骤2)中所述的极性溶剂为甲醇、乙醇、乙酸乙酯或其中任意混合溶剂，加入量为每千克菌丝渣使用2～5L极性溶剂；其中浸提时间可根据本领域常规的方法确定，优选浸提6～15小时。