[发明专利]一种基于多靶酶的丹参药材质量检测方法

权利要求书

1.一种基于多靶酶的丹参药材质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)丹参经甲醇水溶液超声提取后，获得丹参提取物，用缓冲液溶解丹参提取物，得到样品溶液；

(2)取与步骤(1)相同的缓冲液，溶解能被丹参抑制活性的靶酶，获得酶溶液；所述靶酶为凝血酶和血管紧张素转换酶；

所述靶酶为凝血酶时，缓冲液采用pH值为6.5的磷酸盐缓冲液；

所述靶酶为血管紧张素转换酶时，缓冲液采用pH值为8.3的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液；

(3)将样品溶液和酶溶液进行混合、孵育，再加入靶酶底物，进行反应，得到反应液，作为样品组；

所述靶酶为凝血酶时，靶酶底物为S-2238；反应液中的凝血酶终浓度为0.2～0.4U/mL，靶酶底物终浓度为0.2～0.4mM，样品终浓度为0.2～2mg/mL；

所述靶酶为血管紧张素转换酶时，靶酶底物为FAPGG；反应液中的血管紧张素转换酶终浓度为0.02～0.04U/mL，靶酶底物终浓度为0.6～0.8mM，丹参终浓度为0.5～2mg/mL；

(4)采用等量缓冲液替代样品溶液，并重复步骤(2)、(3)，制得的反应液作为对照组，分别测定样品组和对照组的反应液吸光度，通过计算丹参样品对至少两种以上靶酶的抑制率判断丹参药材的质量。

2.如权利要求1所述的丹参药材质量检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述提取的时间为25～35min。

3.如权利要求1所述的丹参药材质量检测方法，其特征在于，所述孵育的时间为0.5～2h。

4.如权利要求1所述的丹参药材质量检测方法，其特征在于，步骤(4)中，所述酶抑制率的计算方法为：

若靶酶为凝血酶，测定靶酶与底物反应后的反应液吸光度；酶抑制率(％)＝[1-(样品组吸光度/对照组吸光度)]×100％；

若靶酶为血管紧张素转换酶，先测定底物刚加入时反应前的反应液吸光度，再测定靶酶与底物反应后的反应液吸光度；酶抑制率(％)＝[1-(样品组吸光度差值/对照组吸光度差值)]×100％，所述吸光度差值为反应前和反应后的吸光度差值。