[发明专利]毛木耳蛋白质提取物制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白质提取技术领域，尤其是一种毛木耳蛋白质提取物制备方法及其应用。

背景技术

随着社会的不断发展，人们的生活品质也不断提高，但人们得肿瘤癌症的几率也越来越高，毛木耳是木耳目(Auriculariales)，木耳科(Auriculariaceae)，木耳属(Auricularia)中的毛木耳种(A.polytricha) 的真菌，是重要的食用菌，亦入药。富含蛋白质、多种矿物质元素和维生素，子实体背面绒毛层丰富的木耳多糖，具有较高的抗肿瘤活性，在目前的研究中以毛木耳栽培技术，毛木耳多糖提取工艺和多糖功能的研究，毛木耳蛋白质提取工艺和毛木耳蛋白质提取物功能的研究。

例如毛木耳蛋白质提取物及其抗肿瘤的应用，CN103285046A，该发明公开了毛木耳蛋白质提取物及其抗肿瘤的应用。该应用是毛木耳蛋白质提取物在制备抑制肿瘤细胞增殖产品中的应用，所述毛木耳蛋白质提取物，按照包括如下步骤的方法制备：1）将毛木耳子实体粉碎后用水浸提，收集水溶性物质得到毛木耳水溶性提取物；2）对所述毛木耳水溶性提取物进行饱和度为80% 的硫酸铵沉淀，收集沉淀，对所述沉淀用去离子水透析后，得到所述毛木耳蛋白质提取物。该毛木耳蛋白质提取物处理人肝癌HepG2 细胞、人乳腺癌MCF-7 细胞和人肺腺癌A-549 细胞72h 后，HepG2、MCF-7、A-549 细胞的增殖均明显受到抑制，且IC50值分别为45μg/mL,20μg/mL,25μg/mL。

该发明的这种毛木耳蛋白质提取物，制备方法较为简单，提取的纯度较差，提取量较小。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种制备简单，蛋白活性高，提取效率高且提取蛋白质纯度较高的毛木耳蛋白质提取物制备方法及其应用。

为解决上述现有的技术问题，本发明采用如下方案：一种毛木耳蛋白质提取物制备方法，包括以下步骤：

1）选取毛木耳用清水清洗，干燥，粉碎至220-250目，得毛木耳粉末；

2）毛木耳粉末中加入2-3倍的清水，搅拌，浸泡，再加入盐酸浓度1-2%的盐酸水溶液调节pH值至2.4~3.2后浸泡，在回流条件下浸提2-3次，合并得浸提液；

3）在浸提液中加入饱和度为95-98%的乙醇，搅拌，浸泡，得沉淀物；

4）在沉淀物中加入去离子水后透析，干燥，得蛋白质提取物。

作为优选，步骤2中浸泡时采用超声波助溶，超声波助溶的频率为30000-40000Hz，采用超声波助溶提高毛木耳粉末在水中的溶解度。

作为优选，步骤2中加入盐酸水溶液浸泡时还需加入毛木耳粉重量3~7倍的提取剂，后浸泡1~2h，并搅拌5~15min，所述提取剂的成分及其重量份为：水5-60份、纤维素酶0.5-3.8份、果胶酶0-3份、金属螯合剂0.1-3份、葡萄糖2-8份、有机酸0.2-25份、醋酸纤维素0.02-0.05份、三羟基聚醚0.01-0.04份、乙醇45-75份，通过纤维素酶和果胶酶破坏毛木耳粉末的细胞壁，提高蛋白质的溶解度，并且提取剂可促进纤维素酶和果胶酶作用效果缩短破坏毛木耳粉末的细胞壁的时间，而且醋酸纤维素和三羟基聚醚提高蛋白质活性。

作为优选，步骤2中加入盐酸水溶液浸泡时还需加入0.1-0.2%的蛋白质抑制剂，防止蛋白质在提取过程中降解。

作为优选，蛋白酶抑制剂为二异丙基氟磷酸或碘乙酸或亮肽素中的一种或两种。

作为优选，步骤2中浸提时温度为2-4℃，每隔25-30min搅拌一次，每次搅拌3-5min，提高浸提效率，在2-4℃的低温下可在浸提时降低酶的活性起到灭酶作用，防止蛋白质降解。

作为优选，步骤3中加入乙醇的体积为浸提液体积的3-5倍，浸泡时温度为2-4℃，采用高浓度的乙醇溶液防止蛋白质溶解。

作为优选，步骤4中透析的方法为：将沉淀物溶解在去离子水中液倒入截留分子为10ku～50ku的透析袋进行透析，提高所提取的蛋白质纯度。

毛木耳蛋白质提取物在抵抗肝癌、乳腺癌、肺癌的产品中应用。

有益效果：本发明提供的这种毛木耳蛋白质提取物制备方法及其应用，制备简单，制备中加入蛋白酶抑制剂防止蛋白质酶解以及在制备过程中降解，加入纤维素酶破坏毛木耳的细胞壁提高蛋白质的溶解度，提高制备蛋白质提取物的纯度。

本发明采用了上述技术方案提供一种毛木耳蛋白质提取物制备方法及其应用，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。

具体实施方式