[发明专利]一种可控分子量海洋源硫酸软骨素的制备方法

说明书

一种可控分子量海洋源硫酸软骨素的制备方法，包括如下步骤：将经处理的鱼骨料粒的料液在40‑60℃下调节pH至8‑9后酶解，酶解过程中维持pH不变；将酶解后的料液调节pH至4‑5后升温使酶解所用酶灭活，然后静置沉降后超滤；将超滤后的料液用乙醇沉淀得到一次沉淀硫酸软骨素；将所得一次沉淀硫酸软骨素用食盐水溶解，并调节溶液pH至11‑13.5，将溶液在50‑75℃下加入双氧水至过氧化氢的浓度为1‑4％氧化3小时以上；将氧化后的溶液降温后用超滤膜过滤，然后用乙醇沉淀、脱水，干燥后即得硫酸软骨素成品。本发明提供的制备方法工艺简单可行，获得的产品纯度非常高，可达99％以上，明显优于现有技术。

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种可控分子量高纯度海洋源硫酸软骨素的制备方法。

背景技术

硫酸软骨素(Chondroitin Sulfate)是从动物软骨组织中提取制备的酸性粘多糖，是共价连接在蛋白质上形成蛋白聚糖的一类糖胺聚糖，分子量在10000-50000Da之间。硫酸软骨素广泛分布于动物组织的细胞外基质和细胞表面，可广泛应用于治疗心脑血管疾病、关节疼痛、关节炎以及用于滴眼液等。另一方面，随着我国蓝色经济的发展，海洋产品日益丰富人民的生活，大量海洋鱼类的骨头作为食品加工的尾料，一般经粉碎后作为饲料等低附加值使用，而从海洋鱼类骨提取硫酸软骨素等高附加值产品成为近些年研究的重点课题之一。

传统的硫酸软骨素生产工艺包括碱解法和酶解法等。碱解法生产的软骨素收率低，杂质多，已基本被淘汰，目前大多数硫酸软骨素生产企业采用酶解法。酶解法利用碱性蛋白酶，2709酶或胰酶等将硫酸软骨素从软骨组织中分离，再经树脂吸附，乙醇沉淀或者超滤等工艺步骤进行纯化，经双氧水脱色后乙醇沉淀，脱水干燥制得，如CN 105418800A、CN104531817A、CN 104418957A等中公开了酶解法制备硫酸软骨素。酶解法的收率相比碱解法大大提高，并且主要杂质蛋白质含量通常能达到2％～6％，硫酸软骨素含量达到90％～98％。

硫酸软骨素分子由氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸分子交替连接组成，氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸分子间由1,4糖苷键连接。硫酸软骨素分子在碱性条件下稳定存在，而在酸性条件下不稳定，在pH值低于4的情况下氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸分子间1,4糖苷键极易断裂而降解成低分子量或者单独的二糖单元。传统的生产低分子量硫酸软骨素的方法是利用硫酸软骨素裂解酶在碱解或酶解步骤下对硫酸软骨素分子进行切割，所获得硫酸软骨素分子量范围宽，分子链不完整，且生产过程分子量难以控制，导致生产的产品与期望分子量范围差异大，且产品纯度也有待进一步提高。

如CN 103342758A公开了一种低分子量硫酸软骨素及其在制备抗阿尔茨海默病的药物中的应用，该发明利用酸性条件下(pH值为5)用双氧水处理，处理时间为8～12小时，反应温度为60～70℃，得到降解的低分子量硫酸软骨素，再采用超滤膜截留分子量5000道尔顿以下的硫酸软骨素。利用该发明生产出来的产品存在以下缺陷：①硫酸软骨素分子不完整，含有大量氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸单糖分子；②采用5000道尔顿的超滤膜截留，期望获得的产品，低于5000Da的产品与双氧水和其他低分子量杂质会共同存在于母液中，产品杂质多，且产品中含有基因毒性杂质双氧水，给患者使用带来风险；③大于5000Da的产品无法利用，造成了巨大的浪费；④硫酸软骨素市场需要不同的规格，按照其制备方法，仅仅获得5000Da以下的产品，无法获得其他分子量段产品。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种可控分子量高纯度海洋源硫酸软骨素的制备方法。本发明的方法可实现硫酸软骨素分子量可控，并且生产的硫酸软骨素颜色洁白，主要杂质蛋白质含量低于2.0％，硫酸软骨素含量达到99％以上。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术手段：

一种可控分子量海洋源硫酸软骨素的制备方法，包括如下步骤：