[发明专利]用于检测人血中具有生物学活性MBL的试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于甘露糖结合凝集素的ELISA检测技术领域，具体涉及一种用于检测人血中具有生物学活性MBL的试剂盒及其检测方法。

背景技术

甘露糖结合凝集素（mannan-binding lectin，MBL）是主要由肝细胞分泌的高度保守的血浆蛋白，为C型凝集素超家族中胶凝素（collectins）家族成员。MBL也是一种急性期反应蛋白，在应激如病原体感染、外科手术等时，其血浆浓度可升高2-3倍。具有前抗体（ante-antibody）之称的MBL通过其糖识别域（carbohydrate recongnition domain，CRD）广泛识别分布于多种病原体如细菌、病毒、寄生虫、真菌等表面的糖结构，包括D-甘露糖、L-岩藻糖、N-乙酰葡萄糖胺、N-乙酰甘露糖胺等，其胶原样区（collagen-like region，CLR）结合甘露聚糖相关丝氨酸蛋白酶（MBL-associated serine protease，MBL-MASP），激活补体凝集素途径而发挥溶破和间接调理功能；或者与吞噬细胞胶凝素受体结合，以不依赖补体的方式启动调理吞噬。Science曾刊文（Thompson C. Protein proves to be a key link in innate immunity[J]. Science, 1995,269(5222):301-302.）称其为“天然免疫系统中的关键分子”。现有资料已表明，MBL是未免疫宿主体内最重要的抗感染天然免疫分子。

随着对MBL研究的不断深入，发现其除了可识别并清除病原体，还具备许多内源性功能（endongenous functions），如结合自身免疫球蛋白；识别缺血再灌注损伤中暴露的自身抗原或疾病状态下修饰的自身抗原；参与对凋亡细胞的吞噬；能够与单核细胞系THP1细胞相互作用，抑制Calbicans诱导的细胞因子分泌，同时对B淋巴细胞系Raji细胞及T细胞系Jurkat细胞均具有免疫调节作用。因此，MBL作为天然免疫中具有多重功能的模式识别分子，不仅仅参与机体的天然免疫防御，亦在天然免疫与获得性免疫之间发挥其作用。

目前已发现MBL结构基因的3个点突变（CGT52TGG、GGC54GAC和GGA57GAA）以及启动子和5′非翻译区突变所致血浆MBL低下而引起的调理吞噬缺损为迄今所发现的最常见的遗传性免疫缺损病。MBL缺损者终生处于高度的感染风险之中，随时可患各种感染甚至威胁生命的感染。近些年研究表明，MBL的抗病机制与其血清浓度水平相关，低水平的MBL容易导致机体的防御功能明显减弱，容易感染克罗恩病、自身免疫性神经障碍、原发性免疫缺陷以及侵袭性真菌感染；相反，最新研究表明高水平的MBL能够提高慢性阻塞性肺疾病患者的存活率。因此，临床上及时检测血液中MBL含量对于机体健康体检、判定机体免疫能力及预测某些自身免疫性疾病具有重要意义。

MBL可选择性识别多种病原体表面以Man、ManNAc、GlcNAc等为末端糖基的糖结构，通过与2个MBL相关丝氨酸蛋白酶（MBL associated serine protease-1/-2、MASP-1、MASP-2）结合，以不依赖抗体和C1q的方式激活补体，发挥溶破和间接调理功能，还能与吞噬细胞胶凝素受体（即C1qR）结合而起直接调理作用。MBL肽链由N端至C端依次有4个结构域：N末端的Cys富集区、含Gly-X-Y三联体重复顺序的胶原样区（collagen-like region，CLR）、卷曲螺旋颈区及C末端的糖识别域（carbohydrate-recognition domain，CRD）。3条肽链通过N末端区的Cys形成二硫键而连接，CLR则相互缠绕成a-螺旋，3个独立折叠的CRD在C末端共同形成1个球形头部，此结构单位又借二硫键或非共价键连接成寡聚体，多至六聚体。MBL的多聚体形式是其功能发挥的关键，多聚体可大大提高MBL与糖分子的亲和力。只有多聚体MBL分子才具有生物学活性，因此，开发能够检测人体中具有生物学活性的多聚体MBL具重要的临床实践意义。