[发明专利]用于检测人血中具有生物学活性MBL的试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.用于检测人血中具有生物学活性MBL的试剂盒，其特征在于：该试剂盒以甘露聚糖作为MBL的结合配体，以抗人MBL-CLR mAb作为MBL的检测抗体。

2.权利要求1所述的用于检测人血中具有生物学活性MBL的试剂盒的检测方法，其特征在于具体步骤为：用pH=9.6的碳酸盐缓冲液稀释甘露聚糖为5mg/L，100μL/孔包被酶联板，4℃过夜；加入1wt% BSA，37℃封闭2h，洗涤后加入含CaCl₂的待检新鲜血浆，100μL/孔，37℃作用1h；洗涤后加入1:400稀释的Biotin-抗人MBL-CLR单克隆抗体，37℃作用1h；洗涤后，加入1:1000稀释的HRP-Avidin，100μL/孔，37℃作用45min；洗涤，加入TMB显色液显色，以2mol/L H₂SO₄溶液终止反应，在自动酶联仪上测定A_450nm值。

3.根据权利要求2所述的用于检测人血中具有生物学活性MBL的试剂盒的检测方法，其特征在于：所述的含CaCl₂的待检新鲜血浆中Ca²⁺的摩尔浓度为20mmol/L。

4.根据权利要求2所述的用于检测人血中具有生物学活性MBL的试剂盒的检测方法，其特征在于：所述的碳酸盐缓冲液为0.05mol/L Na₂CO₃-NaHCO₃缓冲液。

5.根据权利要求2所述的用于检测人血中具有生物学活性MBL的试剂盒的检测方法，其特征在于所述的Biotin-抗人MBL-CLR单克隆抗体的具体制备过程为：

（1）取纯化后的7.8mg/mL的鼠抗人MBL-CLR单克隆抗体500μL，用0.01mol/L PBS稀释1倍后对其透析，4℃过夜；

（2）称取0.3mg Biotin溶于20μL DMSO中，并加入到步骤（1）透析好的鼠抗人MBL-CLR单克隆抗体中，4℃搅拌12h；

（3）将步骤（2）标记好的鼠抗人MBL-CLR单克隆抗体置于PBS中于4℃透析过夜，换液两次最终得到Biotin-抗人MBL-CLR单克隆抗体。