[发明专利]一种氯霉素半抗原及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种半抗原及其制备方法和应用，尤其涉及一种氯霉素半抗原及其制备方法和应用。

背景技术

氯霉素(Chloramphenicol，CAP)是Ehrlich(1947)分离出来的一种广谱抗生素。由于其低廉的价格和稳定的抗菌性，曾在一段时间内作为饲料添加剂和兽医临床常用药品。但氯霉素有严重的毒副作用，能引起再生障碍性贫血症和婴儿灰色综合症。美国和欧共体已禁止在动物中使用氯霉素，并规定在动物源食品中不得检出，且这种不得检出的低限已达到0.01μg/kg。目前，我国动物源食品中氯霉素残留仍很严重，出口的水产品、蜂蜜屡屡被检出氯霉素残留。为保障人民的身体健康，迫切需要建立灵敏度高，特异性强，简便易行的检验方法。

氯霉素检测方法包括微生物法、色谱法、免疫测定法。微生物法易操作、费用低，但灵敏度低、特异性差。色谱法精确可靠、灵敏度高，检测极限可达到0.1μg/kg，但前处理步骤多，回收率偏低。免疫测定具有灵敏度高、特异性强、对仪器设备和人员素质要求低以及样品前处理简单等优点，适于现场监控和大规模样品筛选。

发明内容

本发明的目的是提供一种氯霉素半抗原及其制备方法和应用。

本发明的第一个方面是提供一种氯霉素半抗原，其分子结构式为：

本发明的第二个方面是提供一种如本发明第一个方面所述的氯霉素半抗原的制备方法，包括以下步骤：步骤1，取氯霉素，加入叔丁基二甲基氯硅烷(TBSCl)、咪唑和无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，室温反应完全，纯化，得到TBS-氯霉素，其分子结构式如式(2)所示，其中氯霉素、TBSCl、咪唑和无水DMF的用量比为：1g︰700-800mg︰300-500mg︰3-7mL；步骤2，取TBS-氯霉素，加入二氯甲烷溶解，加入丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶和三乙胺，室温反应完全，纯化，得到含琥珀酰基-TBS-氯霉素，其分子结构式如式(3)所示，其中TBS-氯霉素、丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶和三乙胺的用量比为：0.9746g︰0.81-0.83g︰0.24-0.26g︰100-300μL；；步骤3，取含琥珀酰基-TBS-氯霉素，加入吡啶、乙腈和40％HF，冰浴冷却后，室温反应完全，纯化，得到权利要求1所述的氯霉素半抗原，其中含琥珀酰基-TBS-氯霉素、吡啶、乙腈和40％HF的用量比为：954.94mg︰2-4mL︰5-7mL︰1.5-2mL；；

优选地，上述步骤(1)中，氯霉素、TBSCl、咪唑和无水DMF的用量比为：1g︰750mg︰400mg︰5mL。

优选地，上述步骤(2)中TBS-氯霉素、丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶和三乙胺的用量比为：0.9746g︰0.8236g︰0.2514g︰200μL。

优选地，上述步骤(3)中含琥珀酰基-TBS-氯霉素、吡啶、乙腈和40％HF的用量比为：954.94mg︰3mL︰6mL︰1.780mL。

本发明的第三个方面是提供一种氯霉素抗原，由本发明第一个方面所述的氯霉素半抗原与载体蛋白偶联得到，其分子结构式为：

本发明的第四个方面是提供一种制备如本发明第三个方面所述的氯霉素抗原的方法，包括以下步骤：步骤a，取权利要求1所述的氯霉素半抗原，加入无水二甲基甲酰胺混匀后，加入二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，室温反应过夜，其中，氯霉素半抗原、二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的用量比为：0.09mmol︰0.09-0.15mmol︰0.09-0.15mmol；步骤b，离心，取溶液，将溶液缓慢加入载体蛋白溶液中，所用载体蛋白的量按照半抗原与载体蛋白的摩尔比15-40︰1计；步骤c，反应完全后，透析，得到氯霉素抗原。

优选地，上述步骤a中，氯霉素半抗原、二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的用量比为：0.09mmol︰0.1mmol︰0.1mmol。

本发明的第五个方面是提供一种氯霉素抗体，由本发明第三个方面所述的氯霉素抗原免疫动物制备得到。

本发明的第六个方面是提供由本发明第五个方面所述的氯霉素抗体制备的氯霉素酶联免疫试剂盒。

本发明的第七个方面是提供本发明第一个方面所述的氯霉素半抗原或本发明第三个方面所述的氯霉素抗原在制备氯霉素抗体中的应用。

本发明的第八个方面是提供本发明第五个方面所述的氯霉素抗体或本发明第六个方面所述的氯霉素酶联免疫试剂盒在检测动物源性食品中氯霉素残留的应用。