[发明专利]含有gat-tpinⅡ结构转基因植物实时PCR精准检测的引物和探针及方法有效
| 申请号： | 201710104685.8 | 申请日： | 2017-02-24 |
| 公开（公告）号： | CN106701999B | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 张富丽;常丽娟;尹全;宋君;王东;郭灵安;雷绍荣 | 申请（专利权）人： | 四川省农业科学院分析测试中心 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 成都顶峰专利事务所(普通合伙) 51224 | 代理人： | 任远高 |
| 地址： | 610000 *** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 含有 gat tpin 结构 转基因 植物 实时 pcr 精准 检测 引物 探针 方法 | ||
1.含有gat-tpinⅡ结构转基因植物实时PCR精准检测的引物和探针，其特征在于,
上游引物序列，gat-tpinⅡ-F1：5'-AGTTRGGMTTCAGYGAGCARGGAGA-3'；
下游引物序列，gat-tpinⅡ-R：5'-CCAATCCAGAAGATGGACAAGTC-3'；
荧光探针序列，
gat-tpinⅡ-P2：5'-FAM-CCKCCAGTWGGACCTCACATCCTGATGTAT-TAMRA-3'。
2.含有gat-tpinⅡ结构转基因植物实时PCR精准检测方法，其特征在于,包括以下步骤：
(1)合成以下引物及与引物配合使用的荧光探针，
gat-tpinⅡ-F1：5'-AGTTRGGMTTCAGYGAGCARGGAGA-3'；
gat-tpinⅡ-R：5'-CCAATCCAGAAGATGGACAAGTC-3'；
gat-tpinⅡ-P2：5'-FAM-CCKCCAGTWGGACCTCACATCCTGATGTAT-TAMRA-3'；
(2)制备DNA稀释液；
(3)配制PCR反应体系；
(4)定量PCR检测。
3.根据权利要求2所述的含有gat-tpinⅡ结构转基因植物实时PCR精准检测方法，其特征在于，步骤(1)中合成的引物及荧光探针的浓度均为10μmol/l，步骤(2)中制备的DNA稀释液的浓度为50ng/μl。
4.根据权利要求3所述的含有gat-tpinⅡ结构转基因植物实时PCR精准检测方法，其特征在于，步骤(3)中所述的配制PCR反应体系，即将DNA稀释液加入到反应体系中，所述反应体系包括以下组分：
5.根据权利要求4所述的含有gat-tpinⅡ结构转基因植物实时PCR精准检测方法，其特征在于，所述PCR反应条件为：95℃预变性10min，1个循环；95℃变性15s，56℃退火60s，45个循环。
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