[发明专利]一种月季微繁体系的建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及了一种月季微繁体系的建立方法，属于植物遗传转化领域，具体地说涉及了一种普通月季的微繁体系建立方法。

背景技术

月季(Rosa hybrida)在我国已经有1000多年的历史，主要分为种丰花月季、壮花月季、藤蔓月季、香水月季、灌木月季和月季六大类。2005～2008年三年间，总共831个月季品种在国际上登录，这当中有丰花月季169个、杂种香水月季204个、小花月季89个、灌丛月季161个、月季106个。在国外，月季在17-18世纪传入英国和法国。在此之后，欧洲人民将其作为重要种质与蔷薇进行杂交，培育出众多优质的新品种。目前，全世界培育了20000多月季新品种。科学家们经过大量探索，成功培育出多种抗寒、抗旱、抗病的优良月季新品，并进行了改变花色的育种。时至今日，大多数月季种质资源还未曾用于人工育种，其优良性状还没有得到挖掘和开发，月季新品种培育因此拥有着巨大的潜力。

为了满足人们的需要，组织培养技术在上个世纪末应运而生，以此为基础的转基因手段为传统的月季育种提供了一条全新途径。这种手段可以高效将优良的外源基因转入到生物体当中并得以表达，同时保持生物体性状相对的稳定性。稳定的组培体系和基因转化体系对月季新品种的获得意义重大，并已获得重大成就。但目前现有的月季微繁技术并不完善，存在着成花率低，生根率低，成活率低的问题。因此，在微繁殖体系的建立过程中，保证再生植株的成花率，生根率，成活率是我们面临的重要问题。

发明内容

本发明的目的在于应用植物组织培养技术，在现有技术基础上，提供一种更加完善完整的月季微繁体系的建立方法，克服月季再生体系成花率低，生根率低，成活率低的问题。

为实现上述目的，本发明所述的月季微繁体系的建立方法中，通过将盆栽月季经过外植体消毒、芽诱导培养、芽增殖培养、花诱导培养、生根培养五个过程，成功的将盆栽月季再生至培养瓶中培养。

该方法具体包括以下步骤：

(1)月季外植体消毒

于花市购买普通月季植株，高20cm-40cm，花色不限；剪取月季当年生健壮枝条，以软毛刷清除其表面灰尘，置于盛有清水的烧杯中，加少量清洗剂浸泡10min，期间不断摇动烧杯，流水冲洗1h，Cl₂灭菌20min；在超净工作台中用无菌蒸馏水浸泡清洗3次，无菌滤纸吸干；

(2)芽诱导培养

取步骤(1)消毒后的月季枝条，剪取1.5cm-2cm单芽茎段，形态学下端接种于芽诱导培养基中，接种后培养条件为25℃，光强2000lx，光周期为16小时光照，8小时黑暗，培养30d，得无菌苗；其中，所述的芽诱导培养基为MS培养基+噻苯隆(TDZ)+萘乙酸(NAA)+琼脂+蔗糖，所述TDZ的浓度为1.0mg/L，所述NAA的浓度为0.1mg/L，所述琼脂的浓度为7.2g/L，所述蔗糖的浓度为30g/L，pH值为5.83～5.85；

(3)芽增殖培养

取步骤(2)培养30d后的无菌苗，在超净工作台中将无菌苗切取为1.5cm-2cm带节间茎段，形态学下端接种于芽增殖培养基中，每瓶均匀接种4个茎段，接种后培养条件为25℃，光强2000lx，光周期为16小时光照，8小时黑暗，培养45d；其中，所述的芽增殖培养基为MS培养基+TDZ+NAA+琼脂+蔗糖，所述TDZ的浓度为1.0mg/L，所述NAA的浓度为0.05mg/L，所述琼脂的浓度为7.2g/L，所述蔗糖的浓度为30g/L，pH值为5.83～5.85；

(4)花诱导培养

(a)取步骤(3)培养45d后的无菌苗，在超净工作台中将无菌苗切取为1.5cm-2cm带节间茎段，形态学下端接种于花芽诱导培养基中，接种后标注日期，置于智能人工气候箱中培养40d，获得丛生芽；培养条件为：25℃，光强2000lx，光周期为16小时光照，8小时黑暗；其中，所述花芽诱导培养基为MS培养基+TDZ+琼脂+蔗糖，所述TDZ的浓度为1.0mg/L，所述琼脂的浓度为7.2g/L，所述蔗糖的浓度为40g/L，pH值为5.83～5.85；