[发明专利]金纳米簇-脂质体复合颗粒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种金纳米簇-脂质体复合纳米颗粒，其特征在于，所述纳米颗粒为由脂质体囊泡包裹的金纳米簇，所述脂质体囊泡的表面修饰有二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇，所述金纳米簇中的表面修饰有穿膜肽并结合Cas9蛋白和导向核糖核酸的质粒，所述脂质体囊泡由二油酰磷脂酰乙醇胺、2,3-二油氧基丙基三甲基氯化铵和胆固醇组成；其中，

所述导向核糖核酸的质粒为sgPLK-1a的质粒，且所述导向核糖核酸的质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.根据权利要求1所述的金纳米簇-脂质体复合纳米颗粒，其特征在于，所述穿膜肽为TAT穿膜肽。

3.根据权利要求1所述的金纳米簇-脂质体复合纳米颗粒，其特征在于，所述修饰前的金纳米簇的粒径为1～8nm。

4.根据权利要求1所述的金纳米簇-脂质体复合纳米颗粒，其特征在于，所述金纳米簇和所述Cas9蛋白的摩尔比为0.1～1000：0.1～10000000。

5.根据权利要求4所述的金纳米簇-脂质体复合纳米颗粒，其特征在于，所述金纳米簇和所述Cas9蛋白的摩尔比为1～100：100000。

6.根据权利要求1所述的金纳米簇-脂质体复合纳米颗粒，其特征在于，所述脂质体囊泡中的二油酰磷脂酰乙醇胺、2,3-二油氧基丙基三甲基氯化铵和胆固醇摩尔比为0.1～5：0.1～8：0.1～10。

7.根据权利要求6所述的金纳米簇-脂质体复合纳米颗粒，其特征在于，所述脂质体囊泡中的二油酰磷脂酰乙醇胺、2,3-二油氧基丙基三甲基氯化铵和胆固醇摩尔比为0.2～4：0.2～5：0.1～6。

8.一种权利要求1至7中任一项所述的金纳米簇-脂质体复合纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)按照配比，将Cas9蛋白和导向核糖核酸的质粒与金纳米簇混合后静止获得第一混合液，

(2)按照配比，将步骤(1)获得的第一混合液与脂质体囊泡混合后静止获得第二混合液，

(3)按照配比，将步骤(2)获得的第二混合液与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇混合获得所述金纳米簇-脂质体复合纳米颗粒。

9.根据权利要求8所述的金纳米簇-脂质体复合纳米颗粒的制备方法，其特征在于，步骤(1)、(2)的静止时间和/或(3)的混合时间为15-30分钟。

10.根据权利要求8或9所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中的所述脂质体囊泡的制备方法包括：

(a)按照配比，将二油酰磷脂酰乙醇胺、2,3-二油氧基丙基三甲基氯化铵和胆固醇溶于氯仿与甲醇的混合液中，

(b)旋转蒸发步骤(a)获得的所述混合液至只剩磷脂膜，

(c)在步骤(b)获得的所述磷脂膜中加入水、PBS或葡萄糖，

(d)超声至形成所述脂质体囊泡。

11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，步骤(b)中的旋转蒸发温度为30-35℃。

12.权利要求1至7中任一项所述的金纳米簇-脂质体复合纳米颗粒在制备医疗产品中的应用。

13.权利要求1至7中任一项所述的金纳米簇-脂质体复合纳米颗粒在制备用于治疗肿瘤的药品中的应用。

14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为黑色素瘤、前列腺癌或乳腺癌。