[发明专利]利用植物基原料和内生菌共培养制备生物活性物质的方法

权利要求书

1.一种利用植物基原料和内生菌共培养制备生物活性物质的方法，具体包括以下步骤：

（1）植物基原料的预处理：取无菌培养的活体植物细胞、植物组织或器官繁殖体，或将植物基原料经过烘干和/或造粉和灭菌预处理；

（2）内生菌活化：将内生菌接种于微生物培养基上进行预培养，预培养时间为1-25天，从而制得活化的内生菌；

（3）生物材料与内生菌共培养：在共培养设备中接种步骤（2）中制得的活化的内生菌中，并加入步骤（1）中所制得的含植物基材料的固体或液体培养基进行混合培养，培养时间为4-90天，获得共培养产物；

（4）生物活性物质的提取：将步骤（3）中获得的共培养产物根据所需的生物活性物质的特点，采用醇提、水提、超临界提取、层析收集和喷雾干燥方法，获得生物活性物质的浓缩，再分离和纯化，得到生物活性物质。

2.如权利要求1所述的利用植物基原料和内生菌共培养制备生物活性物质的方法，其特征在于，所述植物基原料包括活的植物细胞和组织、组织培养所获得无性繁殖体和植物生物质；所述活的植物细胞和组织包括种子、细胞、新鲜茎、叶和根；组织培养所获得无性繁殖体包括愈伤组织、原球茎、幼苗、毛状根和胚状体；植物生物质包括药用植物茎秆、叶片、汁液、粉末和植物的愈伤组织、种苗、毛状根和提取物。

3.如权利要求2所述的利用植物基原料和内生菌共培养制备生物活性物质的方法，其特征在于，共培养内生菌为具有产生生物活性物质能力的植物内生真菌或内生细菌或放线菌，是从产生生物活性物质的药用植物中分离获得的。

4.如权利要求2所述的利用植物基原料和内生菌共培养制备生物活性物质的方法，其特征在于，所述步骤（3）中的所述共培养设备包括固体发酵设备、植物生物反应器、发酵罐、培养瓶中的一种或两种以上。

5.如权利要求3所述的利用植物基原料和内生菌共培养制备生物活性物质的方法，其特征在于，所述共培养产物是指培养液和/或混合培养物和/或培养后植物材料和/或培养后内生菌菌体；也可以是固体发酵产物。

6.如权利要求5所述的利用植物基原料和内生菌共培养制备生物活性物质的方法，其特征在于，所述步骤（3）中所获得的共培养产物，可以作为下一代培养的种子菌，循环扩大培养3-5代，且扩大培养的培养基中含有/或不含有植物基原料。

7.如权利要求6所述的利用植物基原料和内生菌共培养制备生物活性物质的方法，其特征在于，所述步骤（2）中内生菌活化的预培养时间为3-10天；所述步骤（3）中生物材料与内生菌共培养中进行混合培养，培养时间为7-50天。

8.如权利要求6所述的利用植物基原料和内生菌共培养制备生物活性物质的方法，其特征在于，所述步骤（3）中加入步骤（1）中所制得的含植物基材料的固体或液体培养基与内生菌一同加入，培养时间为7~50天。

9.如权利要求6所述的利用植物基原料和内生菌共培养制备生物活性物质的方法，其特征在于，所述步骤（3）中加入步骤（1）中所制得的含植物基材料的固体或液体培养基在内生菌接种培养3-20天后加入，加入后继续培养4-60天。

10.如权利要求9所述的利用植物基原料和内生菌共培养制备生物活性物质的方法，其特征在于，所述步骤（3）中加入步骤（1）中所制得的含植物基材料的固体或液体培养基在内生菌接种培养4-10天后加入，加入后继续培养15-45天。