[发明专利]一种同步检测4种辣椒病毒的多重PCR方法

说明书

本发明属于农作物病害诊断和分子生物学技术领域，公开了一种同步检测4种辣椒病毒的多重PCR方法，该PCR体系中含有4对特异性引物(SEQ ID NO1～8)，在一个PCR体系中同步对4种病毒进行扩增，得到了1406bp,1202bp,600bp和376bp的特异性条带，建立并优化了能同步检测BBWV2、PVY、ChiVMV和CMV的多重RT‑PCR反应体系。检测结果表明优化后的多重RT‑PCR反应体系能对田间样品进行快速、高效地、准确的检测。对监测辣椒上PVY等4种常见病毒病在田间的发生情况以及病害流行预测具有十分重要的意义。

技术领域

本发明属于农作物病害诊断和分子生物学技术领域，特别是涉及一种反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的体系及其应用，该体系可用于同步检测4种侵染辣椒的RNA病毒，达到准确、快速、高效检测的目的。

背景技术

辣椒(Capsicum spp.)是茄科辣椒属植物，因其果实风味独特和营养丰富而成为人们喜爱的蔬菜和调味品，还用于食品色素、医药及工业组分的提取，因此在美洲、欧洲、亚洲、非洲和大洋洲等地区广为种植，随着辣椒需求量和贸易量的加大，有进一步扩大的趋势。我国辣椒种植面积133万hm²，经济总产值700亿元，均居世界首位，辣椒还是贵州、云南、四川、重庆等省份贫困山区农民的主要经济来源。病毒病是辣椒上一类重要病害，自上世纪70年代以来，随着种植面积的不断扩大、种植区气候和耕作制度的变化，病毒病的发生呈现逐年上升趋势，侵染后常常造成落花、落叶、落果，减产可达30％-70％，甚至绝收，已成为影响辣椒产量和品质的重要限制因素之一。

目前，在世界范围内可侵染辣椒的病毒病原有49种之多，其中约15个大类的20种病毒能引起严重症状,在我国约有23种能引起病害症状的辣椒病毒病原。常见有黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus，ChiVMV)、辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottlevirus,PMMoV)、番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)、马铃薯Y病毒(Potato virusY,PVY)、蚕豆萎蔫病毒2号(Broad bean wilt virus 2,BBWV2)、烟草脆裂病毒(Tobaccorattle virus,TRV)、辣椒内源RNA病毒(Bell pepper endornavirus，BPEV)等。辣椒植株受病毒侵染后表现不同的症状，常见的有花叶、黄化、斑驳、皱缩、畸形、坏死、植株矮化等。但在自然界，同一辣椒植株同时遭受两种或两种以上病毒侵染(复合侵染)的情况非常普遍，复合侵染不仅能削弱寄主的抗性，加重病害症状，还使得病害的症状更加复杂，给病害识别带来很大的困难，直接影响病害的及时防治。2016年贵州省贵阳市自然发生的辣椒病毒病为害严重，且病害症状复杂，经小RNA深度测序和PCR鉴定发现是BBWV-2CMV、PVY、ChiVMV和CMV四种病毒侵染所致，因此生产上急需准确、快速、简便、易操作的方法同时鉴别多种病毒病害。