[发明专利]一种弓形虫病间接ELISA诊断试剂盒

权利要求书

1.一种重组弓形虫基因，其特征在于，所述基因为弓形虫TgPP1基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种如权利要求1所述的重组弓形虫基因编码得到的重组蛋白rTgPP1。

3.一种弓形虫病间接ELISA诊断试剂盒，其特征在于，所述诊断试剂盒中所用的检测抗原为如权利要求2所述的重组蛋白rTgPP1。

4.如权利要求3所述的弓形虫病间接ELISA诊断试剂盒，其特征在于，所述诊断试剂盒还包括：PBST洗涤液、5％脱脂奶粉封闭液、稀释液、HRP标记的1:150000稀释的兔抗猪IgG二抗、阳性血清、阴性血清、TMB-H₂O₂底物显色液、2mol/L硫酸终止液和抗原包被液；所述抗原包被液为0.05mol/L碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液。

5.如权利要求4所述的弓形虫病间接ELISA诊断试剂盒，其特征在于，所述重组蛋白rTgPP1的质量和抗原包被液的体积的比值为1-5μg:1mL。

6.如权利要求3所述的弓形虫病间接ELISA诊断试剂盒，其特征在于，所述重组蛋白rTgPP1是通过以下步骤制备而成：

S1、根据刚地弓形虫ME49株PP1编码基因序列，将相应的密码子优化为细菌密码子，两端分别加NdeⅠ和HindⅢ限制性内切酶序列，NdeⅠ序列后插入6个His的编码序列，全基因合成目的片段；

S2、目的片段和载体pET-30a(+)用限制性内切酶NdeⅠ和HindⅢ双酶切后，用T4连接酶连接，转化大肠埃希菌DH5α，提取重组质粒pET-30a(+)-TgPP1，经双酶切和测序鉴定正确后转化到BL21(DE3)感受态细胞中；

S3、将经鉴定已转入重组质粒pET-30a(+)-TgPP1的BL21(DE3)感受态细胞经诱导表达、纯化，获得重组蛋白rTgPP1。