[发明专利]一种从鸭肉提取的抗磷脂氧化蛋白、分离纯化方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种从鸭肉提取的抗磷脂氧化蛋白、分离纯化方法及其用途。

背景技术

食品抗氧化剂主要为植物提取或化学合成物，存在带异味和颜色、稳定性差和安全性差等问题。目前蛋白类抗氧化剂的报道很少，更无商品化的蛋白类抗氧化剂问世。

热休克蛋白90(Hsp90)在哺乳动物和微生物体内表达量很高，在受到氧化应激或病理状态下可以大量表达，减少细胞及细胞器的损伤，维持细胞膜的结构和功能，在生理领域已有大量研究，而在食品领域尚未有报道。

如能从鸭肉中提取天然的Hsp90，将其应用于肉制品中抑制磷脂氧化，将起到改善肉品的风味品质的效果。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明提供一种从鸭肉提取的抗磷脂氧化蛋白、分离纯化方法及其用途。

第一方面，本发明提供的一种从鸭肉提取的抗磷脂氧化蛋白，为利用鸭股二头肌中通过Tris-HCl缓冲液匀浆、加入硫酸铵进行盐析，将得到的沉淀用Tris-HCl缓冲液溶解后离心，上清液透析得到而得到的蛋白质。

第二方面，本发明提供了抗磷脂氧化蛋白的分离纯化方法，包括如下步骤：

(1)取鸭股二头肌，剔除可见的结缔组织和脂肪组织后加入Tris-HCl缓冲液中匀浆，离心取上清液，向粗蛋白中加入70wt％硫酸铵进行盐析，混匀后离心，将沉淀用少量Tris-HCl缓冲液溶解后离心，取上清液，将其倒入透析袋中，置于磁力搅拌器上进行透析去盐12h，得到粗蛋白；

(2)将步骤(1)粗蛋白经离心，再经0.45μm的微孔滤膜过滤后，用DEAE52离子交换层析柱纯化，用A相预平衡离子层析柱，待基线平稳后上样，流速为1.5mL·min^-1，待穿透峰走完，基线恢复平稳后，开始用100％B相洗脱,收集洗脱峰，收集产物；

(3)将步骤(2)的收集产物用超滤管浓缩并脱盐，上样于Source15Q层析柱进一步分离纯化，用A相平衡Source 15Q层析柱，待穿透峰走完，基线平稳后，用1.5mL·min^-1的流速，设定35min内使B相浓度从0到100％的线性方式洗脱，收集目的蛋白，并浓缩脱盐。

本发明中，作为一种优选的技术方案，步骤(1)中，所述Tris-HCl缓冲液的pH为8.0，浓度为0.1mol·L^-1。

本发明中，作为一种优选的技术方案，步骤(1)中，匀浆时的转速为12000rpm·min^-1。

本发明中，作为一种优选的技术方案，步骤(1)中，三次离心均采用14000g下进行20min。

本发明中，作为一种优选的技术方案，步骤(2)中，粗蛋白在12000g下离心20min。

本发明中，作为一种优选的技术方案，步骤(2)中，A相采用50mmol·L^-1的Tris-HCl缓冲液，B相为含有1mol·L^-1NaCl的A相。

本发明中，作为一种优选的技术方案，步骤(3)中，A相采用pH为8.0的0.5mmol·L^-1的Tris-HCl缓冲液；B相为含有1mol·L^-1NaCl的A相。

第三方面，本发明提供了抗磷脂氧化蛋白在体外抑制磷脂氧化方面的用途，可以用于肉制品来抑制磷脂氧化，改善肉制品的品质和风味。

本发明中，作为一种优选的技术方案，抗磷脂氧化蛋白用于在体外抑制由H₂O₂引起的磷脂氧化。

本发明中，作为一种优选的技术方案，抗磷脂氧化蛋白在体外抑制磷脂氧化时，将磷脂脂质体与Hsp90复合物混合，Hsp90与磷脂脂质体的摩尔比为1：1000，并于37℃下避光保存。

由于采用以上技术方案，本发明具有如下有益效果：

本发明首先提供了一种从鸭肉提取的抗磷脂氧化蛋白，即热休克蛋白90(Hsp90)，正如本发明的背景技术所说的，热休克蛋白90(Hsp90)在哺乳动物和微生物体内表达量很高，因此，目前研究多数集中中提取微生物、哺乳动物中提取热休克蛋白90，但是，本发明在长期的实践中发现，家禽(尤其是鸭肉中)热休克蛋白90的含量也比较高，而且更容易提取、分离、纯化。本发明就是利用鸭股二头肌中通过Tris-HCl缓冲液匀浆、加入硫酸铵进行盐析，将得到的沉淀用Tris-HCl缓冲液溶解后离心，上清液透析得到而得到的蛋白质。