[发明专利]一种从鸭肉提取的抗磷脂氧化蛋白、分离纯化方法及其用途

权利要求书

1.一种从鸭肉提取的抗磷脂氧化蛋白，其特征在于，为利用鸭股二头肌中通过Tris-HCl缓冲液匀浆、加入硫酸铵进行盐析，将得到的沉淀用Tris-HCl缓冲液溶解后离心，上清液透析得到而得到的蛋白质。

2.一种从鸭肉分离、纯化如权利要求1所述的抗磷脂氧化蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取鸭股二头肌，剔除可见的结缔组织和脂肪组织后加入Tris-HCl缓冲液中匀浆，离心取上清液，向粗蛋白中加入硫酸铵进行盐析，混匀后离心，将沉淀用Tris-HCl缓冲液溶解后离心，取上清液，将其倒入透析袋中，置于磁力搅拌器上进行透析去盐，得到粗蛋白；

(2)将步骤(1)粗蛋白经离心，再经微孔滤膜过滤后，用DEAE52离子交换层析柱纯化，用A相预平衡离子层析柱，待基线平稳后上样，待穿透峰走完，基线恢复平稳后，开始用100％B相洗脱,收集洗脱峰，收集产物；

(3)将步骤(2)的收集产物用超滤管浓缩并脱盐，上样于Source15Q层析柱进一步分离纯化，用A相平衡Source 15Q层析柱，待穿透峰走完，基线平稳后，用1.5mL·min^-1的流速，设定35min内使B相浓度从0到100％的线性方式洗脱，收集目的蛋白，并浓缩脱盐。

3.根据权利要求2所述的一种从鸭肉分离、纯化抗磷脂氧化蛋白的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述Tris-HCl缓冲液的pH为8.0，浓度为0.1mol·L^-1。

4.根据权利要求3所述的一种从鸭肉分离、纯化抗磷脂氧化蛋白的方法，其特征在于，步骤(1)中，匀浆时的转速为12000rpm·min^-1。

5.根据权利要求4所述的一种从鸭肉分离、纯化抗磷脂氧化蛋白的方法，其特征在于，步骤(1)中，三次离心均采用14000g下进行20min。

6.根据权利要求2所述的一种从鸭肉分离、纯化抗磷脂氧化蛋白的方法，其特征在于，步骤(2)中，粗蛋白在12000g下离心20min。

7.根据权利要求6所述的一种从鸭肉分离、纯化抗磷脂氧化蛋白的方法，其特征在于，步骤(2)中，A相采用50mmol·L^-1的Tris-HCl缓冲液，B相为含有1mol·L^-1NaCl的A相。

8.根据权利要求2所述的一种从鸭肉分离、纯化抗磷脂氧化蛋白的方法，其特征在于，步骤(3)中，A相采用pH为8.0的0.5mmol·L^-1的Tris-HCl缓冲液；B相为含有1mol·L^-1NaCl的A相。

9.从鸭肉中提取的抗磷脂氧化蛋白在体外抑制磷脂氧化方面的用途。

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，抗磷脂氧化蛋白用于在体外抑制由H₂O₂引起的磷脂氧化。