[发明专利]一种人参来源的纳米颗粒及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫增强剂领域，具体涉及一种人参来源的纳米颗粒及其制备和应用。

背景技术

微泡(Microvesicles)是细胞外囊泡(Extracellular Vesicles)的一种。与外泌体(Exosomes)不同，微泡主要是通过质膜向外出芽产生的直径100-1000nm左右的纳米级颗粒。这些纳米颗粒中往往携带有蛋白、DNA、RNA等多种活性物质，发挥多种生物活性作用。

免疫增强剂通常指的是在单用或与抗原同时使用时可增强机体免疫应答的物质，亦被称为免疫调节剂或免疫刺激剂。免疫增强剂可通过不同的作用途径发挥作用，如增强单核-巨噬细胞的活性、增强抗原物质的免疫原性和稳定性以及促进抗体的合成与分泌等，从而增强机体的特异性和非特异性免疫应答。

单核-巨噬细胞是血液、淋巴和所有哺乳动物组织类型中常见的吞噬细胞。单核-巨噬细胞是造血系统中可塑性最强的一种细胞，所有组织中都有这种细胞，并且其也具有极强的功能多样性。它们的主要功能是以固定细胞或游离细胞的形式对老化细胞、肿瘤细胞以及病原体等进行吞噬作用，并激活其他免疫细胞；在正常发育、体内平衡、组织修复和对病原体的免疫反应中起很多不同作用。

由于单核-巨噬细胞在机体的非特异性免疫应答和特异性免疫应答中皆扮演重要的角色，且在体内分布广泛，如何调节单核-巨噬细胞的活性是免疫学研究的焦点之一。传统的粒细胞单核-巨噬细胞集落刺激因子只能促进单核-巨噬细胞的生长，但不能活化TLR等相关免疫分子，从而不能充分促进细胞介导的免疫应答，进而清除位于系胞内的病原及肿瘤细胞成分。中药免疫增强剂药性温和、耐药性低、毒副作用小，且具有双向调剂功能的特点，日渐成为免疫增强剂的研究热点。

人参是我国最重要的中药材之一，被誉为“百草之王”，有非常高的药用价值。人参所产生的纳米颗粒级微泡携带有多种人参的有效成分，可能是其发挥药效的重要途径之一。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，提供一种可量化生产的人参来源的纳米颗粒(英文名：Ginseng derived nano-particles，简称GDNPs)，作为天然免疫增强剂的用途。来源于人参的纳米颗粒微泡含有多种人参的生物活性成分，因此作为一种新型的天然免疫增强剂有着良好的应用前景，可应用为一种活化单核-巨噬细胞的免疫增强剂。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

一种人参来源的纳米颗粒，具有膜结构，粒径范围为150-500nm，峰值粒径为280～350nm。

所述人参来源的纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：

(1)将新鲜、洗净的人参通过低速螺旋挤压技术榨出原浆；

(2)将步骤(1)中所得原浆通过筛网过滤除杂，收集滤液；

(3)将步骤(2)中得到的滤液依次进行低速、中速、高速和超速离心，每次离心后弃去沉淀，收集上清液进行下一次离心，其中最后一次离心，收集沉淀；

(4)将步骤(3)中所述最后一次离心收集的沉淀用缓冲液重悬后超速离心1次，收集沉淀；所述沉淀用缓冲液再次重悬后高速离心，收集上清液；所述上清液通过除菌级滤膜即得人参来源的纳米颗粒。

优选的，以上操作在4～25摄氏度环境中进行。

步骤(1)中，所述低速螺旋挤压的转速为30～60转/分钟。

步骤(2)中，所述筛网为200～2000目，优选为200～1000目。

步骤(3)中，步骤(3)中，所述低速离心的离心力为100～500×g，离心时间为5～10分钟；所述中速离心的离心力为1000～5000×g，离心时间为10～30分钟；所述高速离心的离心力为8000～12000×g，离心时间为30～60分钟；所述超速离心的离心力为100000～200000×g，离心时间为60～120分钟，所述低速、中速、高速和超速离心的次数为至少1次；

优选的，所述低速离心的离心力为200～500×g；所述中速离心的离心力为2000～5000×g；所述高速离心的离心力为100000～12000×g；所述超速离心的离心力为100000～120000×g。

步骤(4)中，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液，所述缓冲液的pH范围为pH7.2～7.4；所述超速离心的离心力为100000～200000×g，离心时间为60～120分钟；所述高速离心的离心力为8000～12000×g，离心时间为30～60分钟；所述除菌级滤膜的孔径为0.45μm。