[发明专利]一种肝原代细胞分离制备方法有效
| 申请号： | 201710093643.9 | 申请日： | 2017-02-21 |
| 公开（公告）号： | CN106834210B | 公开（公告）日： | 2021-01-26 |
| 发明（设计）人： | 兰天;罗维 | 申请（专利权）人： | 广州柏赛柯生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 广州润禾知识产权代理事务所(普通合伙) 44446 | 代理人： | 郑永泉 |
| 地址： | 510006 广东省广州市番禺区小谷*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 肝原代 细胞 分离 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种肝原代细胞分离制备方法，其特征在于，采用复合酶对哺乳动物肝脏进行灌注分离制得肝原代细胞，包括如下步骤：
S1.灌注：取哺乳动物动物肝脏，先后用清洗液、灌注液I、灌注液II进行灌注；
S2.剥离：将步骤S1处理后的肝脏在清洗液中剪碎溶解，得到肝细胞悬液；
S3.过滤：将步骤S2得到的肝细胞悬液过滤得滤液，加入预冷的清洗液，在4℃温度下离心取沉淀，即得肝原代细胞；
其中，所述清洗液为缓冲液II，所述灌注液I为缓冲液I，所述灌注液II为缓冲液II和复合酶；
所述缓冲液I每升包括下述重量份的各组分：NaCl 8000 mg，KCl 400 mg，NaH2PO4·H2O88.17 mg，Na2HPO4 120.45 mg，HEPES 2380 mg，NaHCO3 350 mg，EGTA 190 mg，Glucose 900mg，其余为H2O；
所述缓冲液II每升包括下述重量份的各组分：NaCl 8000 mg，KCl 400 mg，NaH2PO4·H2O 88.17 mg，Na2HPO4 120.45 mg，HEPES 2380 mg，NaHCO3 350 mg，CaCl2·2H2O 560 mg，其余为H2O；
所述复合酶为下述重量份的各组分：胶原酶A 25份、胶原酶D 25份、胶原酶H 10份。
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