[发明专利]一种测定巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C含量的高效液相色谱测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C含量的高效液相色谱测定方法，更具体是涉及一种用于测定主要由巴西蜂胶、色拉油、明胶、甘油、水、蜂蜡、卵磷脂等材料制成的巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C含量的高效液相色谱方法。

背景技术

巴西蜂胶（外文名：Brazilian Bee Propolis），是指产于巴西的蜂胶，因其外观与成分等与世界其他地区的蜂胶有较大差别，且巴西蜂胶作用明确，药理研究充分而备受世人关注，是世界上品质最好的蜂胶。根据植物学来源和化学成分，巴西蜂胶可分为12类。某些样品符合“巴西蜂胶”，但并不意味着物理、化学和生物特性的相同，且巴西蜂胶分布全国，有着广泛的植物多样性和复杂的化学成分变化。近年来关于巴西蜂胶的研究实际上是来自东南地区的（第十二类），也被称为“绿蜂胶”，其主要植物来源为分布在巴西东南和南部的酒神菊属植物Baccharis dracunculifolia DC。巴西蜂胶是世界公认的高品质蜂胶，因为巴西蜂胶含有更多的萜烯、多酚类以及黄酮类化合物，且具有独特的自然香味。巴西绿蜂胶中含有独特的阿替匹林C（Artepillin C）成分，它是巴西蜂胶中的一类重要的生理活性成分，且目前尚未在其他地区蜂胶中检测到。研究发现阿替匹林C对各种培养的肿瘤细胞和转移的癌细胞具有强的细胞杀灭作用。运用低剂量的阿替匹林C对试验的肿瘤细胞就表现出明显的抑制生长作用，尤其对快速生长的细胞有特别显著的细胞杀灭作用。在培养基中加入阿替匹林C时，对人胃癌细胞、人肺癌细胞和鼠结肠癌细胞，就显示出抑制这些细胞生长的作用。由于阿替匹林C 的功效，以及比较高的含量，已被作为公认的巴西蜂胶的主要的质量评价指标，我国的行业标准 GH/T 1114-2015 就建立了蜂胶中阿替匹林C的测定方法。

由于巴西蜂胶口味的原因，为了使人们更易服用和接受巴西蜂胶产品，生产企业将巴西蜂胶加工成巴西蜂胶软胶囊。生产巴西蜂胶软胶囊的主要成分是巴西蜂胶冻干粉、色拉油、明胶、甘油、水、蜂蜡、卵磷脂等，其中巴西蜂胶粉、色拉油、蜂蜡、卵磷脂等一般为胶囊内容物，明胶，甘油，水组成软胶囊外壳。由于巴西蜂胶软胶囊的主要组分是巴西蜂胶粉，因此评价巴西蜂胶软胶囊产品质量的主要指标仍然是阿替匹林C的含量。现在评价巴西蜂胶软胶囊的主要方法是测定巴西蜂胶软胶囊内容物中阿替匹林C的含量，但经过我们实验研究发现，巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C会明显被明胶组成的外壳吸附，导致内容物中阿替匹林C的含量降低，从而引起产品质量不稳定的问题。因此，我们发明的方法主要是以整个胶囊为单位来计算阿替匹林C的含量，方法主要是选择合适的试剂和处理方法将胶囊壳（明胶层）破坏，使吸附的阿替匹林C释放出来，然后使用高效液相色谱测定。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中不能准确测定巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C含量的问题，提供一种测定巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C含量的高效液相色谱测定方法。方法的技术关键是对软胶囊样品的处理方法并以整粒胶囊计阿替匹林C的含量。

为解决以上问题本发明所采用的方案：

本发明提供一种测定巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C含量的高效液相色谱测定方法，包括下述步骤：

1)样品的预处理

直接称取一粒软胶囊置于均质器中进行高速均质，均质器转速大于5000rpm；

2)样品的碱解

将均质物置于烧杯中，加入碱液；在水浴锅中碱解，水浴温度为30℃～100℃，待样品彻底溶解后，继续水解0.5H；

3）样品的酸化和乙醇提取

将碱解后的样品置于室温放凉至室温，加入酸度调节剂酸化，直至使得溶液pH小于4.0，然后加入无水乙醇进行超声波提取，提取频率40-100Khz，最佳温度在40-60℃，提取时间20-30min，提取后使用0.45µm滤膜过滤，过滤后得超声波提取物；

3）液相色谱分离

取超声波提取物上样分析，色谱条件为：流动相：甲醇：甲酸或磷酸水溶液=90～20：10～80，按体积比计；检测波长：315nm；采用梯度洗脱方式分离；

色谱分析条件为：色谱柱采用C18柱；流速：0.5～1.4mL/min；柱温：15℃～35℃。

上述一种测定巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C含量的高效液相色谱测定方法，其中，所述所述磷酸水溶液浓度为0.1%～0.4%，按体积百分比浓度计。

上述一种测定巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C含量的高效液相色谱测定方法，其中，优选地，所述流动相的甲醇：磷酸水溶液体积比为48：52，所述磷酸水溶液浓度为0.3%，按体积百分比浓度计。