[发明专利]一种使用纳米探针穿入细胞核的方法

权利要求书

1.一种使用纳米探针穿入细胞核的方法，该方法包括：

步骤1：对现有纳米探针进行加工；

步骤1.1：获取待加工金字塔形氮化硅探针的俯视图形区域，计算出该俯视图形的轮廓；

步骤1.2：采用离子束沿俯视图形的轮廓线逐层剥落金字塔形氮化硅探针各腰面的氮化硅；

步骤1.3：当加工后探针的俯视图形的轮廓与原金字塔形氮化硅探针的针尖轮廓重合时停止进一步加工；获得纳米探针；

步骤2：对待穿透细胞进行处理：将鼠尾胶原Ⅰ型蛋白附着于待穿透细胞的细胞膜表面；

步骤3：进行细胞穿透；

步骤3.1：将步骤1最终获得的探针对准经步骤2处理后细胞的细胞核，进行下针，检测探针上受力情况；

步骤3.2：监测探针受力变化，若探针出现两次受力突变则判断探针穿入了细胞核。

2.如权利要求1所述的一种使用纳米探针穿入细胞核的方法，其特征在于所述步骤1最终获得的纳米探针高度为6µm,直径为200nm；所述步骤1.2中采用电压为60kv,束流为0.28nA的离子束沿俯视图形的轮廓线逐层剥落金字塔形氮化硅探针各腰面的氮化硅。

3.如权利要求1所述的一种使用纳米探针穿入细胞核的方法，其特征在于所述步骤2的具体方法为：

步骤2.1：配制HEPES（4-羟乙基哌嗪乙磺酸）溶液；

步骤2.1.1：将HEPES粉末溶于灭菌的三蒸水中，获得HEPES溶液，每100 ml灭菌的三蒸水中溶解1.2 gHEPES粉末；

步骤2.1.2：用孔径为0.2 uM的过滤器过滤步骤2.1.1获得的HEPES溶液，将过滤后的溶液密封冷藏放置；

步骤2.2：配制0.2 mg/ml鼠尾胶原Ⅰ型蛋白的溶液；

将鼠尾胶原蛋白Ⅰ型溶液与步骤2.1最终获得的HEPES溶液混合，并且使混合溶液中的鼠尾胶原Ⅰ型蛋白的浓度为0.2 mg/ml；

步骤2.3：取目标细胞培养溶液，去除细胞培养溶液中的培养液，获得目标细胞；

步骤2.4：用步骤2.2获得的混合溶液浸没步骤2.3获得的目标细胞，静置一段时间，使混合溶液中的鼠尾胶原Ⅰ型蛋白附着于细胞表面；

步骤2.5：去除剩余的鼠尾胶原蛋白Ⅰ型溶液，获得附着有鼠尾胶原Ⅰ型蛋白的目标细胞；

步骤2.6：将步骤2.5获得的附着有鼠尾胶原Ⅰ型蛋白的目标细胞置于培养液中培养至少24个小时。