[发明专利]一种用于猪孤雌激活胚的体外培养液及培养方法有效
| 申请号： | 201710090092.0 | 申请日： | 2017-02-20 |
| 公开（公告）号： | CN106834216B | 公开（公告）日： | 2020-06-16 |
| 发明（设计）人： | 张德福;戴建军;张树山;吴彩凤;陈亚宁;王文杰 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073 |
| 代理公司： | 北京市领专知识产权代理有限公司 11590 | 代理人： | 林辉轮 |
| 地址： | 201106 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 猪孤雌 激活 体外 培养液 培养 方法 | ||
1.一种用于猪孤雌激活胚的体外培养液，其特征在于：所述体外培养液的原料包括mPZM-3胚胎培养液及五水乳酸钙和丙酮酸钠，且所述体外培养液中五水乳酸钙的浓度为0.606g/L，丙酮酸钠的浓度为0.022g/L；所述体外培养液所用溶剂为富氢水，且其中H2的含量为1.2～1.6ppm。
2.根据权利要求1所述的一种用于猪孤雌激活胚的体外培养液，其特征在于，所述mPZM-3胚胎培养液的原料包括mPZM-3基础培养液、L-谷氨酰胺、亚牛磺酸、L-半胱氨酸、青霉素、硫酸链霉素以及牛血清白蛋白，且它们的配比为1L：0.146g：0.546g：0.069g：100000IU：70000IU：3g；所述mPZM-3胚胎培养液所用溶剂为富氢水，且其中H2的含量为1.4ppm。
3.根据权利要求2所述的一种用于猪孤雌激活胚的体外培养液，其特征在于，所述mPZM-3基础培养液包括如下浓度的溶质：氯化钠6.312g/L，碳酸氢钠2.119g/L，氯化钾0.746g/L，磷酸二氢钾0.048g/L，硫酸镁0.048g/L；还包括2％的必需氨基酸和1％的非必需氨基酸。
4.一种权利要求1～3任一项所述的体外培养液用于培养猪孤雌激活胚胎的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将猪孤雌激活胚胎在含5μmol/L细胞松弛素B的体外培养液中洗三次，移入含5μmol/L细胞松弛素B的体外培养液中培养3～5h；
(2)将上述处理后的胚胎用不含细胞松弛素B的培养液洗三次，移入不含细胞松弛素B的体外培养液中培养168h，至所述胚胎发育成囊胚。
5.根据权利要求4所述的一种体外培养液用于培养猪孤雌激活胚胎的方法，其特征在于，步骤(1)中所述猪孤雌激活胚胎在含5μmol/L细胞松弛素B的体外培养液中培养处理的时间为4h。
6.根据权利要求4所述的一种体外培养液用于培养猪孤雌激活胚胎的方法，其特征在于，步骤(1)中所述猪孤雌激活胚胎的培养密度为每500μL体外培养液培养40～60枚胚胎。
7.根据权利要求4所述的一种体外培养液用于培养猪孤雌激活胚胎的方法，其特征在于，步骤(2)中的培养条件为38.5℃，5％CO2，饱和湿度。
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