[发明专利]可控性HIV‑1基因组靶向编辑系统和其靶向载运系统

权利要求书

1.一种可控性HIV-1基因组靶向编辑系统，其特征在于，包括表达可控的编辑酶，搭配多重导引RNA(gRNA)；

具体地，所述质粒系统对编辑酶的表达添加了控制元件，使编辑酶的表达或者由LTR启动子和TAT蛋白调控表达，或者由内置哺乳动物源的强启动子和HIV-1的R元件组成的嵌合启动子控制其表达，或者由内置哺乳动物强启动子和TetO组成的嵌合启动子控制表达；其特征在于，所述编辑酶表达质粒包括如下质粒：p1、p2、p3、p7、p8、p10、p11和p13；所述gRNA表达质粒包括如下质粒：p4、p5、p9、p12、p14和p15。

所述多重gRNA指的是针对HIV-1基因组多个位点和/或CCR5的编码框基因组序列设计的靶向序列。其特征在于，所述多重gRNA表达载体中含有序列表中Seq ID No.1-5的序列中的至少2种。所述gRNA表达质粒包括如下质粒：p4、p5、p9、p12、p14和p15。

所述编辑酶、gRNA共表达质粒包括如下质粒：p6-1、p6-2和p6-3；

所述p1的序列如序列表中Seq ID No.7所示，p5的序列如序列表中Seq ID No.20所示，

p6-1的序列如序列表中Seq ID No.8所示，p7的序列如序列表中Seq ID No.9所示，p6-3和p15的五重gRNA表达序列如Seq ID No.21所示。

2.根据权利要求1所述的可控性HIV-1基因组编辑系统，所述带有5’-和3’-LTR的质粒系统能够整合基因组，其对基因组的整合依赖于细胞内所感染的HIV-1活病毒。

3.一种用于输送权利要求1-2任一所述编辑系统的靶向载运系统，其特征在于，所述脂质体主要由以下组分制备而成：

二硬脂酰磷脂酰胆碱DSPC：胆固醇：多肽-PEG-磷脂质量比＝20-70:10-30:0.0001-2；

或者，二棕榈酰磷脂酰胆碱DPPC：二硬脂酰磷脂酰胆碱DSPC：1,2-二油酰基磷脂酰胆碱DOPC：胆固醇：多肽-PEG-磷脂的摩尔比＝5:1:0.5-3:0.5-2:0.0001-0.5。

4.根据权利要求1-3所述的载运系统，其特征在于，所述载运系统含有PEG化的靶向脂质体，PEG为双功能性的，除了共价连接磷脂成分外，还共价偶联了特异的靶向多肽；所述靶向多肽包括单靶点多肽和多靶点多肽中的任一种或几种组合；所述单靶点多肽包括抗CD4多肽aCD4或aCD4scFV、抗CCR5多肽aCCR5、抗CXCR4多肽aCXCR4；所述多靶点多肽包括aCD4_CCR5、aCCR5_CD4、aCD4_CXCR4、aCXCR4_CD4、aCCR5_CXCR4、aCXCR4_CCR5；所述偶联的PEG分子量范围为200-10000，所述偶联的磷脂为磷脂酰乙醇胺或者其衍生物中的一种或多种；

aCD4scFV的编码序列为序列表中Seq ID No.18；

aCD4_CCR5的序列为序列表中Seq ID No.12，其中其氨基可以放到左侧端或者右侧端；

aCCR5_CD4的序列为序列表中Seq ID No.13；

aCCR5_CD4scFV的编码序列为序列表中Seq ID No.19；

aCD4_CXCR4的序列为序列表中Seq ID No.16；

aCXCR4_CD4的序列为序列表中Seq ID No.17；

aCCR5_CXCR4的序列为序列表中Seq ID No.14；

aCXCR4_CCR5的序列为序列表中Seq ID No.15。

上述功能性多肽，还可以直接与PE等脂质分子共价偶联，可直接添加整合入脂质体膜分子层中。

5.根据权利要求3和4所述的载运系统，其特征在于，PEG-磷脂分子上还可偶联穿透肽，形成“穿透肽-PEG-磷脂”，该分子与靶向多肽-PEG-磷脂搭配使用；穿透肽-PEG-磷脂与其他靶向多肽-PEG-磷脂的摩尔比为0.0001-2:1。

6.根据权利要求3-5所述的载运系统，其特征在于，脂质体组分中还可添加透明质酸化的磷脂，与靶点多肽-PEG-磷脂和穿透肽-PEG-磷脂搭配使用，所述透明质酸化的磷脂与其他多肽-PEG-磷脂的摩尔比为0.00001-1：1。