[发明专利]一种双酶偶联‑化学法合成ε‑己内酯的工艺

权利要求书

1.一种双酶偶联-化学法合成ε-己内酯的工艺，具体步骤如下：向反应器中加入离子液体作为反应介质，向其中加入葡萄糖、环己酮和酰基供体，使葡萄糖浓度为1.0-3.0mol/L，酰基供体浓度为0.5-2.0mol/L，加入双酶交联酶聚集体为催化剂进行反应制得产品，其中双酶交联酶聚集体的使用量为25-50g/L，所述离子液体为1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐([EMIM][BF₄])、1-乙基-3-甲基咪唑氯盐([EMIM][Cl])或三乙基甲基铵氟硼酸盐([Et₃MeN][BF₄])。

2.根据权利要求1所述的一种双酶偶联-化学法合成ε-己内酯的工艺，其特征在于：环己酮采用连续滴加的方式加入，加入速度为0.02-0.1mol/h·L。

3.根据权利要求1所述的一种双酶偶联-化学法合成ε-己内酯的工艺，其特征在于：向反应体系加入无机弱碱中和副产物乙酸，其用量为0.2-1.0mol/L。

4.根据权利要求1所述的一种双酶偶联-化学法合成ε-己内酯的工艺，其特征在于：所述酰基供体为乙酸乙酯、乙酸酐或乙酸2-氯乙酯。

5.根据权利要求1所述的一种双酶偶联-化学法合成ε-己内酯的工艺，其特征在于：所述反应于25-40℃，150-250rpm，通气量1.0-5.0vvm条件下反应8-15h。

6.根据权利要求1所述的一种双酶偶联-化学法合成ε-己内酯的工艺，其特征在于：还包括后处理步骤，所述后处理为反应结束后用乙酸乙酯溶解反应混合液，滤出双酶交联酶聚集体，滤液经真空减压浓缩，用甲苯萃取产物；优选地，所述萃取物用10％NaHCO₃洗涤，再用无水硫酸镁干燥，真空减压浓缩得产品。

7.根据权利要求1所述的一种双酶偶联-化学法合成ε-己内酯的工艺，其特征在于：所述双酶交联酶聚集体为葡萄糖氧化酶/南极假丝酵母脂肪酶B(GOD/CALB)双酶交联酶聚集体或葡萄糖氧化酶/米根霉脂肪酶(GOD/ROL)双酶交联酶聚集体。

8.根据权利要求1-7任一项所述的一种双酶偶联-化学法合成ε-己内酯的工艺，其特征在于：所述的GOD/CALB双酶交联酶聚集体的制备方法如下：将GOD酶粉和CALB酶粉混合物，用pH 6.0-7.0缓冲液溶解，于4℃条件下搅拌下加入硫酸铵,使其浓度为0.4-0.6kg/L,再向此溶液中加入交联剂戊二醛，使其浓度为0.1-0.5％，交联2-3h，得到的混合溶液离心，去掉上清液，沉淀用去离子水洗涤，冷冻干燥，既得GOD/CALB双酶交联酶聚集体；所述的GOD/ROL双酶交联酶聚集体的制备方法如下：将GOD酶粉和ROL酶粉混合物，用pH 6.5-8.0缓冲液溶解，于4℃条件下搅拌下加入丙酮,其加入量为2-5L/L,再向此溶液中加入交联剂戊二醛，使其浓度为0.1-0.5％，交联2-3h，得到的混合溶液离心，去掉上清液，沉淀用去离子水洗涤，冷冻干燥，既得GOD/ROL双酶交联酶聚集体。

9.根据权利要求8所述的一种双酶偶联-化学法合成ε-己内酯的工艺，其特征在于，所述的GOD/CALB双酶交联酶聚集体的制备所加入的GOD酶粉和CALB酶粉的酶活力之比为5:1-10:1；所述的GOD/ROL双酶交联酶聚集体的制备所加入的GOD酶粉和ROL酶粉的酶活力之比为8:1-12:1。

10.根据权利要求3所述的一种双酶偶联-化学法合成ε-己内酯的工艺，其特征在于：所述的无机弱碱为KHCO₃。