[发明专利]靶向CD20的抗体偶联药物及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种制备抗体偶联药物或其药学上可接受的盐的方法，其特征在于，所述抗体偶联药物结构如式I所示：

mAb-(L-D)n        I

其中，

mAb表示重组抗CD20单抗，所述重组抗CD20单抗为利妥昔单抗或其生物类似药；

D表示小分子毒素；

L为连接抗体和小分子毒素的接头；并且L为马来酰亚胺己酰基-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄氧羰基；

n为偶联于所述抗体的所述小分子毒素的平均偶联数量，且n为4.2±0.5；和

“-”为键；

其中所述抗体偶联药物的结构如下式所示：

所述方法包括以下步骤：

(1)将所述重组抗CD20单抗和还原剂在pH7.6的PB反应缓冲液中在25±1℃下进行还原反应，所述还原反应进行90±10分钟，从而得到含有经还原的重组抗CD20单抗的反应体系；其中所述还原剂为三(2-羧乙基)膦，且所述单抗和还原剂的摩尔比为1：2.9～1：3.1；

(2)将小分子毒素在乙腈和水中的溶液滴加至步骤(1)的反应体系中，在4±0.5℃下进行偶联反应，所述偶联反应进行60±10分钟；其中所述乙腈和水的体积比例为1：1，且步骤(1)中的单抗与小分子毒素的摩尔比为1：7.0～1：8.0；

(3)向步骤(2)反应体系中加入L-半胱氨酸终止缓冲液终止偶联反应，所述L-半胱氨酸终止缓冲液由DTPA溶液溶解L-半胱氨酸制备得到；和

(4)步骤(3)偶联反应终止后，进行缓冲液置换，转移偶联溶液至TFF系统，将原PB反应缓冲液更改为HT制剂缓冲液，然后用0.22微米Rapid-Flow装置过滤；所述HT制剂缓冲液1L含有L-组氨酸3.18g，海藻糖二水合物70g和吐温80 0.2mL，使用0.5mol/L盐酸调节pH至6.5，0.22μm膜过滤。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，n为4.2±0.3。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法的步骤(1)中，所述经还原的重组抗CD20单抗为链间二硫键被还原为巯基的重组抗CD20单抗。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法的步骤(1)中，所述单抗和还原剂的摩尔比为1：2.95～1：3.05。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法的步骤(1)中，所述单抗和还原剂的摩尔比1：2.99～1：3.01。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法的步骤(2)中，所述步骤(1)中的单抗与小分子毒素的摩尔比为1：7.2～1：7.7。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法的步骤(2)中，所述步骤(1)中的单抗与小分子毒素的摩尔比为1：7.4～1：7.6。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述n为4.2；所述方法的步骤（1）中，将所述重组抗CD20单抗和还原剂在pH7.6的PB反应缓冲液中在25℃下进行还原反应，所述还原反应进行90分钟，所述单抗和还原剂的摩尔比为1：3；所述方法的步骤（2）中，将小分子毒素在乙腈和水中的溶液滴加至步骤(1)的反应体系中，在4℃下进行偶联反应，所述偶联反应进行60分钟，且步骤(1)中的单抗与小分子毒素的摩尔比为1：7.5。