[发明专利]一种携带白介素6基因的重组狂犬病病毒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物免疫学技术领域。更具体地，涉及一种携带免疫增强因子白介素6基因的重组狂犬病病毒及其应用。

背景技术

由狂犬病病毒(Rabies virus，RV)引起的狂犬病(Rabies)是以侵染中枢神经系统为特点的烈性人兽共患传染病，一旦发病致死率几乎高达100％。亚非地区属于狂犬病的高发地，猫、狗等家养动物是携带RV的主要宿主，约99％的患者是被这些动物咬伤或抓伤后而患病，狂犬病仍是严重威胁这些地区人们生命安全的重要传染病。我国是狂犬病的高发区，发病人数仅次于印度，高居世界第二位。随着家养宠物的增加，我国狂犬病的控制和防治依然任重道远。目前对于狂犬病，主要以有效的疫苗防治为主，人或者动物一旦发病，无特效药可治，所以，安全有效的疫苗是消除我国人间狂犬病的重要手段。

在我国，犬只成为狂犬病的主要带毒宿主和传播源，要想在我国消灭人狂犬病，就必须减少流浪狗的数量，普及家养犬只的免疫，使其免疫率达到70％以上，先在动物中消灭狂犬病。我国目前虽然刚批准几款具自主知识产权的兽用灭活狂犬疫苗，但因生产规模的限制、生产成本的偏高和长期使用进口灭活疫苗的惯性，国产兽用灭活疫苗尚未在国内大量施用。绝大部分经济发达的城市仍然首选进口灭活疫苗，这些灭活疫苗对于农村和经济落后地区来说价格太高，难以大规模推广使用，国产的灭活疫苗虽然价格便宜，但其免疫效果不佳。因此，有必要进一步降低研发成本，开发出价格低廉、安全、有效的人用及兽用狂犬病疫苗。

免疫增强因子白介素6(IL6)已经被广泛用于疫苗的佐剂。IL6作为分子佐剂，具有多种生物学功能。首先IL6可以激活B细胞和诱导T细胞的成熟，增强机体产生特异性抗体的能力；其次，IL6可以提高免疫球蛋白IgG的亲和性，使有效抗体的比例更高，更加有效的中和抗原或者清除病原；同时，IL6还可以促进细胞毒性T细胞的产生，增强细胞免疫，及时清除病原；另外，IL6也是一种较强的炎症因子，可以诱导局部炎症反应，适度的炎症反应有利于机体清除病原及产生更强的免疫应答。所以，将IL6作为分子佐剂，可以有效的提高疫苗免疫效果，增强机体的特异性免疫应答。但是，IL6作为一种炎症因子，过量表达或使用会会引起过度的炎症反应而损害机体。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服上述现有技术的缺陷和不足，利用分子生物学手段，以狂犬病疫苗候选株HEP-Flury为骨架，将免疫增强因子IL6基因插入HEP-Flury；通过拯救获得携带犬IL6的重组狂犬病毒株，能够免疫诱导产生更高的抗狂犬病病毒中和抗体水平，降低了犬用疫苗的成本。而且，本发明将IL6基因重组至狂犬病毒中，既能稳定表达IL6蛋白，又能避免其过度表达，克服了过量IL6引起病理损伤的缺陷。

本发明的目的是提供一种携带白介素6基因的重组狂犬病病毒rHEP-CaIL6。

本发明另一目的是所述携带白介素6基因的重组狂犬病病毒rHEP-CaIL6在作为或制备狂犬病疫苗方面的应用。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

一种携带犬IL6基因的重组狂犬病病毒rHEP-CaIL6，是以狂犬病病毒HEP-Flury株为骨架，将SEQ ID NO.1所示的犬IL6基因插入HEP-Flury，得到携带犬IL6基因的重组质粒pHEP-CaIL6，最后拯救筛选获得重组狂犬病病毒株rHEP-CaIL6。

其中，SEQ ID NO.1所示的犬IL6基因是利用通过生物信息学，从我国大量饲养的中华田园犬中扩增得到，其表达的IL6蛋白对几乎所有的犬只产生作用。

具体地：所述重组狂犬病病毒rHEP-CaIL6是将犬IL6基因克隆到狂犬病病毒HEP-Flury株全长cDNA克隆中，构建了表达犬IL6蛋白的重组cDNA克隆pHEP-CaIL6；然后将cDNA克隆pHEP-CaIL6和表达狂犬病病毒N、P、G和L蛋白的辅助质粒共转染BHK-21细胞，拯救获得了携带犬IL6基因的一株嵌合狂犬病病毒rHEP-CaIL6。

更具体地，所述重组狂犬病病毒rHEP-CaIL6中，犬IL6基因被克隆至狂犬病病毒株HEP-Flury假基因区，即G基因和L基因中间，构建策略如附图1所示。

该重组狂犬病病毒rHEP-CaIL6携带免疫增强因子IL6蛋白，能够免疫诱导产生更高的抗狂犬病病毒中和抗体，且产生更好的保护效果，降低了犬用疫苗的成本。