[发明专利]快速检测唾液DNA中微生物污染的试剂、试剂盒与其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，更具体地，涉及用于DNA技术领域，特别是指一种快速检测唾液DNA中微生物污染的试剂、试剂盒与其应用。

背景技术

2013年5月,有6个孩子的好莱坞女星兼导演安吉丽娜·朱莉证实,通过基因检测得知,自己遗传携带了乳腺癌易感基因BRCA1,使得她患乳腺癌几率高达87％,患卵巢癌几率50％,同时她的母亲和姨妈先后因乳腺癌不幸去世。因此,朱莉分别于2014年4月和2015年3月主动接受了双乳和卵巢的切除手术,尽可能降低患癌风险。

随着分子遗传学的发展,根据诺贝尔奖获得者麦克黑尔和哈罗德的研究发现:所有肿瘤的根本机制都是基因序列的损坏,即肿瘤是一种基因病,其主要致病因素包括先天性的家族遗传及后天的基因突变。其中,先天性的致病基因具有家族聚集性,有害突变基因遗传给后代的概率为50％,且遗传到有害变异基因的人群,患癌风险将极大升高。

自2005年起,基因检测技术在肿瘤诊断领域的应用正在逐步扭转美国肿瘤患者的生存局面。今天,美国已有超过500万人做了基因检测，使得一些重大慢性病治愈率大幅提高，如家族型肠癌的发病率降低了90％，死亡率降低了70％；英国超过200万人做了基因检测，目前基因检测已成为该国人身保险必选项目。在进行基因检测时，外周血是最优秀的样本来源，但是外周血采样必须使用专用采血管，并且运输上也较为困难。随着科研人员的不断研究发现，唾液样本中有大量活细胞，状态稳定，便于运输，并且唾液样本较外周血而言采样简单，无需专业人员就可以进行样本采集。然而，唾液样本的最大问题在于口腔微生物也存在于唾液中，在进行DNA提取时，微生物DNA也会掺杂到唾液DNA中，从而影响后续医学检验分析结果，甚至会导致结果不可用。

因此，如何在医学检验分析前检测并评估唾液DNA中微生物的污染状态，成为了业界目前最急需解决的问题。

发明内容

本发明的主要目的就是针对以上现状，提供一种快速检测唾液DNA中微生物污染的试剂、试剂盒与其应用，以克服现有技术中的不足。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例提供了一种快速检测唾液DNA中微生物污染的试剂，其包含具有SEQ ID NO：1所示序列的第一引物和具有SEQ ID NO：2所示序列的第二引物。

在一些较为具体的实施方案中，所述试剂包括浓度为0.5uM～5uM的第一引物、浓度为0.5uM～5uM的第二引物，其余部分包含超纯水；

所述快速检测唾液DNA中微生物污染的试剂的pH值为8.0～9.0。

在一些更为具体的实施方案中，所述试剂包括浓度为1uM的第一引物、浓度为1uM的第二引物，其余部分包含超纯水；

所述快速检测唾液DNA中微生物污染的试剂的pH值为8.5。

本发明实施例还提供了一种快速检测唾液DNA中微生物污染的试剂盒，其包括前述的快速检测唾液DNA中微生物污染的试剂。

在一些较为具体的实施方案中，所述试剂盒还包括PCR扩增检测的常规组件，所述PCR扩增检测的常规组件包括TaqDNA聚合酶、PCR缓冲液、脱氧核糖核苷三磷酸混合物和超纯水。

在一些较为具体的实施方案中，所述试剂盒还包括阴性对照物和阳性对照物。

本发明实施例还提供了一种唾液DNA中微生物污染的快速检测方法，其包括：

提供所述的快速检测唾液DNA中微生物污染的试剂或所述的试剂盒；

将待检测的唾液DNA样品，所述快速检测唾液DNA中微生物污染的试剂以及PCR扩增检测的常规组件混合均匀，之后进行PCR扩增。

优选的，所述待检测唾液DNA样品与快速检测唾液DNA中微生物污染的试剂的体积比为1uL～5uL:15uL～25uL。

在一些较为具体的实施方案中，所述PCR扩增的条件包括：

预扩增，包括：在90℃～100℃温度条件下反应1min～5min；

PCR循环，包括：

首先进行10～30个循环，每个循环包括：依次在90℃～100℃下保温10s-50s，50℃～72℃下保温10s～50s，65℃～85℃下保温10s～50s；

其后，依次在65℃～85℃下保温1min～5min，4℃保存。

更为优选的，所述PCR循环包括：

首先进行20个循环，每个循环包括：依次在95℃下保温30s，55℃下保温30s，72℃下保温30s；

其后，在72℃下保温5min，4℃保存。