[发明专利]一种蛭弧菌微生态制剂的发酵制备方法

权利要求书

1.一种蛭弧菌微生态制剂的发酵制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)使用大肠杆菌作为宿主，接入发酵培养基中；

2)接种蛭弧菌菌液至发酵罐中进行培养；

3)在发酵周期中流加大肠杆菌；

4)固液分离去除底部大肠杆菌，取上层澄清液即得蛭弧菌生态制剂；

所述步骤1)的发酵培养基为葡萄糖1～20g/L；胰蛋白胨1～20g/L；氯化钠1～20g/L；氯化钙0.1～2g/L，pH为6.5～8.0之间；

所述步骤3)中在发酵周期6～16小时内，流加大肠杆菌，所述大肠杆菌CFU为10¹⁰～10¹⁸/ml之间，流加时间为2～6小时之间，流加总发酵体积1～10％的量；

所述步骤3)中发酵周期为18～24小时。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)的发酵培养基的大肠杆菌CFU为10¹⁰～10¹⁸/ml之间。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)的蛭弧菌菌液PFU为10⁶～10⁸/ml，其来源为：双层平板，下层为1.5％琼脂平板，上层平板为葡萄糖1～20g/L；胰蛋白胨1～20g/L；氯化钠1～20g/L；氯化钙0.1～2g/L，琼脂15～20g/L，pH为6.5～8.0之间，取100μlCFU为10⁵～10¹⁰/ml的宿主菌液与100μl PFU为10³～10⁵/ml的蛭弧菌混合加入上层平板进行筛选，挑取噬菌斑，使用大肠杆菌进行扩培，最后制备得PFU为10⁶～10⁸/ml的蛭弧菌菌液，接种体积为发酵液体积的1～10％之间。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中，发酵罐培养条件为：温度为25～32℃，转速为50～200rpm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤4)中固液分离的方法为将所得的发酵液，在2～15℃温度下静置12～24h，使得大肠杆菌沉降于底部，取上层澄清部分，将澄清液使用超滤膜进行过滤，膜孔径为0.5～1.5μm，即得蛭弧菌生态制剂。