[发明专利]一种高效杀灭滴虫等医学原虫的细菌培养上清液的制备方法和及其利用

说明书

技术领域

本发明属于病原生物学领域，具体涉及一种高效杀灭滴虫等医学原虫的细菌培养上清液的制备方法和及其利用方法。

背景技术

原虫为单细胞真核动物.医学原虫是寄生在人体腔管、体液、组织或细胞内的致病及非致病性原虫,约有40余种，医学原虫感染后容易引起阿米巴性痢疾、阿米巴性脓肿(以上主要为溶组织阿米巴)、阴道毛滴虫感染等疾病。原虫感染可发生在人体任何部位和组织，随着经济发展，大部分原虫性疾病逐渐减少，但是近年来由于受性概念的转变，阴道滴虫病发病又有上升，美国每年妇女感染人数为300万，全世界为1.8亿，国外资料表明：滴虫感染率与性接触次数有关，成年处女感染率为零。我国上世纪50年代滴虫的感染率已婚妇女为20％左右，上世纪70年代发病率明显下降，以性机能旺盛期为易感年龄。

在局部原虫感染治疗中、特别是阴道滴虫病治疗中局部治疗常常用灭滴灵(甲硝唑)或凝胶消毒剂，而灭滴灵有致癌作用，不适合孕妇等特殊人群使用，而且灭滴灵和消毒剂容易导致局部微生物菌群平衡失调，导致瘙痒等不适感。

发明内容

为克服上述技术缺陷，本发明提供了一种广高效杀灭滴虫等医学原虫的细菌培养上清液的制备方法和及其利用方法，具有毒性低、效果块、配制方法简便等特点。

本发明目的是通过采用以下技术方案实现的：

一种高效杀灭滴虫等医学原虫的细菌培养上清液的制备方法和及其利用方法，其特征在于：所述培养基包括自配基础培养基、促进艰难梭菌生长的添加剂、蒸馏水和促进艰难梭菌毒素分泌的添加剂。

所述促进艰难梭菌生长的添加剂为动物肠上皮水解产物；

所述添加液与蒸馏水的体积比为1:99～5:95；

所述促进艰难梭菌毒素分泌的添加剂为甲醇:

所述甲醇添加量为10～100mg/L:

优选的，所述自配基础培养基的配方为可溶性淀粉10g/L，酵母浸出液5g/L，磷酸氢二钠0.1g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，维生素B₂ 0.1g/L。

优选的，所述动物血液水解产物为鸟类或哺乳类动物肠上皮，处理温度为190度以上200度以下,处理压力2个大气压以上。

优选的，所述甲醇其纯度在99％以上。

优选的，所述培养基的制备方法包括如下步骤：

(1)将动物肠上皮在190度以上200度以下温度和2个大气压以上的条件进行水解，制备细菌生长促进剂；

(2)按自配基础培养基配方称取可溶性淀粉10g/L，酵母浸出液5g/L，磷酸氢二钠0.1g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，维生素B₂ 0.1g/L，加入所述细菌生长促进剂和所述蒸馏水，混匀，121℃高压灭菌25min；所述细菌生长促进剂与蒸馏水的体积比为1:99～5:95；

(3)灭菌后放置室温冷却至60℃后添加甲醇50mg。

优选的，所述培养细菌为艰难梭菌；

优选的，所述艰难梭菌可分泌艰难梭菌毒素A和B以及二元毒素B；

优选的，所述艰难梭菌为ATCCBAA-1805菌株；

优选的，所述艰难梭菌培养上清液，可以以原始状态(液态)使用，使用浓度为1～10％左右的水溶液；

优选的，所述艰难梭菌培养上清液，可以经过浓缩干燥使用，使用时浓度为10～1000mg/L。

优选的，所述艰难梭菌培养上清液，可以经过蛋白盐析、沉淀等精化后使用，使用时浓度为1～100mg/L。

优选的，所述的上清液处理物可添加到外用药物使用

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

(1)本发明培养基利用了细菌生长促进剂，可促进艰难梭菌的生长和毒素的分泌，提高培养上清中的毒素含量，达到能够杀灭原虫的浓度。

(2)本发明方法所获得的培养上清液可以低毒性、短时间、高效的杀灭局部的原虫。

具体实施方式

为使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，下列实施例中未提及的具体实验方法，通常按照常规实验方法进行。

实施例1：本发明培养基和传统培养基对艰难梭菌生长对比测试

1、配制传统培养基

秤取脑心浸液肉汤(BHI)培养基(购自青岛海博生物技术有限公司)38.5g，现配1L液体培养基，分注试管后121度、1.2个大气压灭菌15分钟后，接种艰难梭菌ATCC BAA-1805设为对照组。