[发明专利]DNA聚合酶链置换活性检测方法及试剂盒在审
| 申请号： | 201710071711.1 | 申请日： | 2017-02-09 |
| 公开（公告）号： | CN108410962A | 公开（公告）日： | 2018-08-17 |
| 发明（设计）人： | 盛司潼;孙文龙 | 申请（专利权）人： | 广州康昕瑞基因健康科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12Q1/48 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 510000 广东省广州市萝*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 单链区 配对区 链置换活性 扩增反应体系 检测 茎环结构 扩增产物 扩增模板 扩增引物 酶切产物 限制性内切酶酶切位点 限制性内切酶 扩增缓冲液 互补配对 检测结果 扩增反应 凝胶电泳 单链环 试剂盒 酶切 制备 测试 | ||
1.一种DNA聚合酶链置换活性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、制备扩增反应体系并进行扩增反应，得扩增产物；所述扩增反应体系包括扩增模板链，扩增引物，待测DNA聚合酶，dNTP以及扩增缓冲液；所述扩增模板链从3’至5’端依次包括第一单链区、茎环结构区和第二单链区；所述茎环结构区从3’至5’方向依次包括第一配对区、单链环区和第二配对区，所述第一配对区和第二配对区完全互补配对；所述第二单链区上含有限制性内切酶酶切位点；所述扩增引物结合在第一单链区上；
B、采用相应的限制性内切酶对扩增产物进行酶切，得到酶切产物；
C、对酶切产物进行凝胶电泳测试，根据检测结果确定DNA聚合酶的链置换活性。
2.根据权利要求1所述的DNA聚合酶链置换活性检测方法，其特征在于，所述限制性内切酶酶切位点与第二单链区5’末端之间的距离至少为20bp。
3.根据权利要求1所述的DNA聚合酶链置换活性检测方法，其特征在于，所述第一单链区长度为15至20bp，所述扩增引物与第一单链区完全互补配对。
4.根据权利要求1所述的DNA聚合酶链置换活性检测方法，其特征在于，所述单链环区的长度为3至10bp。
5.根据权利要求1所述的DNA聚合酶链置换活性检测方法，其特征在于，所述第二单链区为(dA)a、(dT)a、(dC)a、(dG)a或(U)a,，20≤a≤80。
6.根据权利要求1所述的DNA聚合酶链置换活性检测方法，其特征在于，所述扩增反应体系中还包括牛血清白蛋白。
7.根据权利要求1所述的DNA聚合酶链置换活性检测方法，其特征在于，所述凝胶电泳测试包括琼脂糖凝胶电泳测试、Page胶电泳测试。
8.一种DNA聚合酶链置换活性检测试剂盒，其特征在于，包括扩增模板链，所述扩增模板链从3’至5’端依次包括第一单链区、茎环结构区和第二单链区；所述茎环结构区从3’至5’方向依次包括第一配对区、单链环区和第二配对区，所述第一配对区和第二配对区完全互补配对；所述第二单链区上含有限制性内切酶酶切位点。
9.根据权利要求8所述的DNA聚合酶链置换活性检测试剂盒，其特征在于，所述限制性内切酶酶切位点与第二单链区5’末端之间的距离至少为20bp。
10.根据权利要求8所述的DNA聚合酶链置换活性检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括扩增引物，所述扩增引物结合在所述第一单链区。
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