[发明专利]一种检测ADRB1基因单核甘酸多态性位点的方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种检测ADRB1基因单核甘酸多态性位点的方法及试剂盒。

背景技术

高血压等心血管疾病严重威胁人类健康，是50岁以上中老年人的常发疾病，具有高患病率、高致残率和高死亡率的特点。据保守估计，我国高血压患者人数超过了1.6亿，且发病率呈逐年上升趋势。对高血压及其并发症的治疗已经成为全球第三大经济负担。药物是当前和今后相当长的一段时间内治疗高血压及其并发症的主要手段。

然而，由于患者的生理状态(如年龄、性别、种族、肥胖、高血压、糖尿病等)、环境危险因素(如吸烟、饮酒)及遗传多态性等导致药物反应(疗效和不良反应)的个体差异，使得接受药物治疗的患者中约有20％-50％病情未得到良好控制。20多年来的遗传药理学研究结果表明其中最重要、最根本的因素是遗传因素，即药物代谢酶、转运体和受体(药物作用靶点)的基因组多态性导致了其编码蛋白的功能改变，进一步使血药浓度和药物敏感型显著不同。

β1-肾上腺素受体(β1adrenergic receptor，ADRB1)是介导儿茶酚胺作用的一类组织受体，为G-蛋白偶联型受体，参与人体对血压的调节，其基因的多态性与高血压密切相关。Ser49Gly和Arg389Gly是ADRB1基因上两个与心血管疾病相关的多态性位点，二者均可在体外及体内改变受体的活性。其中Ser49Gly的多态性与高血压的发病可能没有显著相关性，而Arg389Gly位于细胞内羧基端，影响配体介导的腺苷酸环化酶活性及G蛋白偶联功能，进而影响心率和血压。研究表明，Arg389是高血压的易感基因，基因型为Arg389纯合子的人群更易发展为原发性高血压。

ADRB1基因的多态性还与抗高血压药物，尤其是在人体内的反应性密切相关，这里所说的反应性包括了药物的疗效和安全性两个方面，同种剂量的药物作用于拥有不同基因型的患者，有的人恰好有效，有的人根本无效，还有的人会出现药物的毒副反应。美托洛尔和布新洛儿等β-肾上腺素受体阻滞剂(β-阻滞剂)通过阻断交感神经活性，减少去甲肾上腺素的释放，从而降低血压，已被证实能够提高心血管疾病患者的存活率并降低死亡率，是临床上治疗高血压病最常用的一线药物，但是治疗效果受β1-肾上腺素受体(ADRB1)基因多态性的影响因而在不同心血管疾病患者中表现出异质性。心脏在改变β-受体与G蛋白之间分子相互作用中，Arg389比Gly389强3-4倍的信号转导能力，活力更持久，且对激动剂的反应更敏感，因此Arg389Arg基因型高血压患者可能需要更高剂量的β-阻滞剂才能达到与Arg389Gly或Gly389Gly基因型患者相同的治疗效果。Arg389Arg基因型的患者在接受低剂量的β-阻滞剂比高剂量的增加双倍的死亡风险，而Gly389携带者在接受高剂量或低剂量β-阻滞剂时在死亡风险上无明显差异。Gly49对激动剂具有更强的亲和力，在激动剂长期刺激下脱敏效果更明显，Gly49基因型患者对β-受体阻滞剂的抑制作用较Ser49基因型患者更为敏感。

因此利用基因检测技术对高血压患者的ADRB1基因多态性进行解读，根据个体与药物治疗相关基因的遗传多样性制定不同的治疗方案，实现药物治疗个体化具有重要的临床意义。根据检测的结果调整患者的用药剂量，既可以使药物发挥最佳的疗效，最大限度地防止毒副反应的发生，也可以避免药物的资源浪费。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种检测ADRB1基因单核甘酸多态性位点的方法，其能够简捷、直观、准确的对ADRB1基因单核苷酸多态性基因型进行检测、分析。

为实现以上目的，本发明的技术方案为：

检测ADRB1基因单核甘酸多态性位点的方法，其具体步骤为：

1)特异性引物的设计

根据被证实的ADRB1基因标签单核甘酸多态性位点，设计特异性扩增引物、ARMS特异性扩增引物、内标引物、特异性探针、内标探针；其中，所述特异性探针5'端带有荧光基团、3'端带有荧光淬灭基团；

2)获得待测样品基因组DNA

3)荧光定量PCR扩增

以待测标本的DNA为模板，用步骤1)所述的特异性扩增引物进行PCR反应，并分析检测结果。

进一步，所述步骤1)中，所述ADRB1基因标签单核甘酸多态性位点包括：ADRB1rs1801252和ADRB1rs1801253位点。

ADRB1rs1801252位点即为Ser49Gly，又称为A145G，使编码的49位丝氨酸被甘氨酸取代(Ser→Gly)。