[发明专利]一种检测ADRB1基因单核甘酸多态性位点的方法及试剂盒

权利要求书

1.检测ADRB1基因单核甘酸多态性位点的方法，其特征在于，具体步骤为：

1)特异性引物的设计

根据被证实的ADRB1基因标签单核甘酸多态性位点，设计特异性扩增引物、ARMS特异性扩增引物、内标引物、特异性探针、内标探针；其中，所述特异性探针5'端带有荧光基团、3'端带有荧光淬灭基团；

2)获得待测样品基因组DNA

3)荧光定量PCR扩增

以待测标本的DNA为模板，用步骤1)所述的特异性扩增引物进行PCR反应，并分析检测结果。

2.根据权利要求1所述的检测ADRB1基因单核甘酸多态性位点的方法，其特征在于，所述步骤1)中，所述ADRB1基因标签单核甘酸多态性位点包括：ADRB1rs1801252和ADRB1rs1801253位点。

3.根据权利要求2所述的检测ADRB1基因单核甘酸多态性位点的方法，其特征在于，ADRB1rs1801252位点的上游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，下游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；145AARMS引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，特异性探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；145GARMS引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示，特异性探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示；ADRB1rs1801253位点的上游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示，下游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示；1165GARMS引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示，特异性探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：10所示；1165CARMS引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：11所示，特异性探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：12所示，内标正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：13所示，内标反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：14所示，内标探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：15所示。

4.根据权利要求2所述的检测ADRB1基因单核甘酸多态性位点的方法，其特征在于，步骤3)中，所述PCR扩增为所述ADRB1rs1801252位点和所述ADRB1rs1801253位点组合进行双重PCR扩增。

5.用于检测ADRB1基因标签单核甘酸多态性位点的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括ADRB1基因单核甘酸多态性位点的特异性扩增引物、ARMS特异性扩增引物、内标引物、特异性探针、内标探针、PCR缓冲液、HotStart Taq酶，UNG酶。

6.根据权利要求5所述的用于检测ADRB1基因标签单核甘酸多态性位点的试剂盒，其特征在于，所述特异性扩增引物如SEQ ID NO:1-2所示，ARMS引物如SEQ ID NO:4-5所示，和/或特异性扩增引物如SEQ ID NO:7-8所示，ARMS引物如SEQ ID NO:10-11所示。

7.根据权利要求5所述的用于检测ADRB1基因标签单核甘酸多态性位点的试剂盒，其特征在于，所述特异性探针如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6所示，和/或如SEQ ID NO:10、如SEQ ID NO:12所示。

8.根据权利要求5所述的用于检测ADRB1基因标签单核甘酸多态性位点的试剂盒，其特征在于，内标引物如SEQ ID NO:13-14所示。

9.根据权利要求5所述的用于检测ADRB1基因标签单核甘酸多态性位点的试剂盒，其特征在于，内标探针如SEQ ID NO:15所示。

10.根据权利要求5所述的用于检测ADRB1基因标签单核甘酸多态性位点的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照液和空白对照液，所述阳性对照液含有4种质粒DNA混合液，所述4种质粒DNA分别含有2种不同的ADRB1rs1801252位点等位基因和2种不同的ADRB1rs1801253位点等位基因，所述空白对照为Tris-HCl缓冲液。