[发明专利]婴幼儿食品及奶粉中多聚果糖含量的离子色谱法测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学领域，尤其是涉及含多聚果糖的制品中，多聚果糖含量的测定方法。采用带积分安培检测器的离子色谱仪，检测制品中的多聚果糖含量。

背景技术

多聚果糖是从菊苣根中提取的、具有保健功能的低聚糖，由α-果糖以β-1,2糖甙键连接，在其末端连接一个葡萄糖残基而形成，分子式为(C₆H₁₂O₆)-(C₆H₁₂O₅)_n(n2-60)，平均聚合度大于等于23，相对分子质量344-11400。多聚果糖是一种良好的“益生元”，具有调节肠道菌群、增殖双歧杆菌、促进钙吸收的作用。我国GB14880-2012《食品营养强化剂使用标准》中规定婴幼儿配方食品、奶粉中，多聚果糖用量不超过64.5g/kg。

多聚果糖的测试方法有液相色谱法、离子色谱法、分光光度法、酶联免疫试剂盒法。婴幼儿食品和奶粉中含有多种对多聚果糖测定干扰的物质。该领域常用的多聚果糖测试方法为用乙醇提取，然后再进行测试，然而仅低聚果糖(聚合度为2-8)可溶于乙醇，而更高聚合度的果聚糖是不溶于乙醇的。

发明内容

本发明解决的技术问题是：为了克服现有婴幼儿食品及奶粉中多聚果糖含量测定方法中，干扰物质过多造成的测试结果不准确的缺陷，提供一种婴幼儿食品及奶粉中多聚果糖含量的离子色谱法测定方法。将婴幼儿食品及奶粉样品酶解，将低聚糖转化成单糖，用带积分安培检测器的离子色谱仪分别检测酶解前的样品和酶解后的样品，折算出低聚糖的含量。本发明可以把果糖和蔗糖目标峰分开，灵敏度和检出限较低。

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种含多聚果糖制品中多聚果糖含量的测定方法，该方法包括：

(1)将含多聚果糖的溶液与淀粉酶接触，得到第一溶液；

(2)将等量的两份第一溶液，分别与葡聚酶/果糖酶复合酶溶液和醋酸盐缓冲液接触，得到第二溶液和第三溶液；

(3)将第二溶液和第三溶液冷却处理；

(4)将步骤(3)冷却处理后的第二溶液和第三溶液稀释，得到稀释液A和稀释液B；以及

(5)采用离子色谱法测试稀释液A中的果糖浓度，稀释液B中的蔗糖浓度和果糖浓度，计算得到多聚果糖的含量。

优选的，步骤(4)中，将骤(3)冷却处理后的第二溶液和第三溶液稀释至果糖和/或蔗糖的线性区间是0.5～20μg/mL，然后0.20-0.30μm滤膜过滤，优选采用0.22μm滤膜过滤。

优选的，所述离子色谱法，流动相：A为H₂O，B为100mM NaOH，C为100mM NaOH+500mM NaHAC；

梯度洗脱条件为：0-20min，A：B：C＝90:10：0；20-25min，A：B：C＝0:0：100；25-50min，A：B：C＝90:10：0。

优选的，步骤(1)中，将含多聚果糖的溶液与淀粉酶在40-80℃，优选60℃水浴振荡25-60分钟，优选30分钟，然后冷却；其中，淀粉酶的用量为：8-9g/L，优选8.33g/L。

优选的，所述醋酸盐缓冲液的醋酸根离子浓度为0.2mol/l。

优选的，所述葡聚酶/果糖酶复合酶溶液为含有葡聚酶和果糖酶的醋酸盐缓冲液，其中葡聚酶含量为10-15mg/100ml醋酸盐缓冲液，果糖酶含量为5-10mg/100ml醋酸盐缓冲液。

优选的，步骤(2)中，所述葡聚酶/果糖酶复合酶溶液与第一溶液的体积比用量为1:1，所述醋酸盐缓冲液与第一溶液的体积比用量为1:1。

优选的，步骤(2)中，将等量的两份第一溶液，分别与葡聚酶/果糖酶复合酶溶液和醋酸盐缓冲液，50-70℃水浴振荡50-70分钟，优选60℃水浴振荡60分钟。

优选的，多聚果糖LcFOS的含量由下述公式计算得到

LcFOS＝K×(F-S/1.9)；

其中，K为换算系数，由下述公式计算得到，

在该公式中，n为多聚果糖的平均聚合度；

F为酶解得到的果糖的含量，单位为毫克每百克(mg/100g)，由下述公式计算得到，

c_a为稀释液A中的果糖的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)；

c_b为稀释液B中的果糖的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)；

f为第二溶液和第三溶液的稀释倍数；

m为含多聚果糖的溶液中的固含量，单位为克(g)；