[发明专利]一种猪肝细胞无血清培养基及其制备方法

权利要求书

1.一种猪肝细胞无血清培养基，其在基础培养液中添加有如下组分：牛胰岛素10.00mg/L，人转铁蛋白5.50mg/L，亚硒酸钠5.02μg/L，乙醇胺2.00mg/L，地塞米松196.26μg/L，纤粘连蛋白0.5mg/L，维生素C 10.00mg/L，肝细胞生长因子60.00μg/L，表皮生长因子80.00μg/L，胰高血糖素2.00mg/L和牛血清白蛋白1.50g/L。

2.根据权利要求1所述的猪肝细胞无血清培养基，其特征在于：所述基础培养液为Williams’Medium E基础培养液。

3.根据权利要求2所述的猪肝细胞无血清培养基，其特征在于：所述基础培养液为包含有青霉素和链霉素的Williams’Medium E基础培养液。

4.一种制备权利要求1-3中任一所述的猪肝细胞无血清培养基的方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1：于无菌环境中，按所述各组分的含量配制各组分的母液；

S2：将各组分的母液按比例加入基础培养液中，充分混匀，即得到所述的猪肝细胞无血清培养。

5.根据权利要求4所述的制备猪肝细胞无血清培养基的方法，其特征在于：步骤S1中，各组分的母液的配制方法如下：

将牛胰岛素、人转铁蛋白、亚硒酸钠和乙醇胺溶解于水中，配制成含有10μg/mL牛胰岛素、5.5μg/mL人转铁蛋白、2.9×10^-8M亚硒酸钠和2μg/mL乙醇胺的母液；

将地塞米松干粉溶解于无水乙醇中，配制成浓度为1mg/mL的地塞米松乙醇溶液，然后用基础培养液稀释至浓度为0.1mg/mL，得到地塞米松母液；

将纤粘连蛋白溶解于PBS缓冲液中，配制成浓度为0.5mg/mL的纤粘连蛋母液；其中，所述的PBS缓冲液为含0.1wt％的牛血清白蛋白(BSA)的无Ca²⁺、Mg²⁺的PBS缓冲液，其pH为6.4～6.8；

将维生素C溶解于水中，配制成浓度为10mg/mL的维生素C母液；

将肝细胞生长因子溶解于水中，配制成浓度为200μg/mL的肝细胞生长因子母液；

将表皮生长因子溶解于水中，配制成浓度为200μg/mL的表皮生长因子母液；

将胰高血糖素溶解于水中，配制成浓度为4.00mg/mL的胰高血糖素母液；

将牛血清白蛋白溶解于基础培养液中，配制成浓度为50mg/mL的牛血清白蛋白母液。

6.根据权利要求4所述的制备猪肝细胞无血清培养基的方法，其特征在于：所述基础培养液在使用时添加浓度为100IU/mL的青霉素与浓度为100IU/mL的链霉素。