[发明专利]一种免疫缺陷大鼠模型的构建方法

权利要求书

1.一种免疫缺陷大鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将针对大鼠DNA的Prkdc和IL2Rγ基因敲除的gRNA分别进行体外转录，再分别与体外转录的CAS9蛋白mRNA混合，冻存于无RNA酶的超纯水中，得到相应的注射液A及注射液B；

(2)将人SIRPa基因组DNA扩增，纯化，冻存于无RNA酶的超纯水中，得到注射液C；

(3)采用显微注射法将注射液A和注射液B分别注射进不同的大鼠受精卵的胞质中，然后将大鼠受精卵分别移植入不同假孕雌鼠体内，培育得到第二代大鼠A和第二代大鼠B；

(4)采用显微注射法将注射液C注射进大鼠受精卵的原核中，然后将大鼠受精卵移植入假孕雌鼠体内，培育得到第二代大鼠C；

(5)将第二代大鼠A、第二代大鼠B和第二代大鼠C进行杂交，繁殖F1代；再将F1代进行杂交，得到敲除了IL2Rγ和Prkdc基因并转入了人SIRPa基因的免疫缺陷大鼠模型。

2.根据权利要求1所述的免疫缺陷大鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤(1)中的敲除大鼠Prkdc基因采用两条gRNA序列，分别为：第一外显子gRNA序列1：TTCCGGCACTATGGCGGACC；第一外显子gRNA序列2：GCCAGTTACCAGCTGATCCG。

3.根据权利要求1所述的免疫缺陷大鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤(1)中的敲除大鼠IL2Rγ基因采用两条gRNA序列，分别为：第二外显子gRNA序列1：CAGCCGACCAACCTCACTAT；第四外显子gRNA序列2：GAGTGAATCTCAGGTAGAAC。

4.根据权利要求3所述的免疫缺陷大鼠模型的构建方法，其特征在于，敲除大鼠IL2Rγ基因还采用另外两条gRNA序列，分别为：第二外显子gRNA序列1：CAGCCGACCAACCTCACTAT；第四外显子gRNA序列3：GAGCAACCGAGATCGAAGCT。

5.根据权利要求1所述的免疫缺陷大鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，体外转录CAS9蛋白mRNA采用T7转录试剂盒、T3转录试剂盒或SP6转录试剂盒。

6.根据权利要求1所述的免疫缺陷大鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(4)中的假孕雌鼠在SPF级别条件下饲养。

7.根据权利要求1所述的免疫缺陷大鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤(3)中的大鼠受精卵取自在SPF级别条件下饲养的受孕雌鼠。

8.一种免疫缺陷大鼠模型，其特征在于，所述大鼠模型敲除了IL2Rγ和Prkdc基因并转入了人SIRPa基因。