[发明专利]一种适配子结合蛋白的检测方法

权利要求书

1.一种双探针，包括识别探针和捕捉探针，其特征在于：所述识别探针是单链寡核苷酸，包括串联连接的适配子序列和被捕捉序列；所述捕捉探针包括捕捉序列以及修饰在捕捉探针上的光交联基团和报告基团，所述捕捉序列是单链寡核苷酸；识别探针上的适配子序列用于识别并结合适配子结合蛋白，捕捉探针的捕捉序列用于识别识别探针上的被捕捉序列，并通过碱基互补作用与识别探针的被捕捉序列结合；所述适配子结合蛋白是溶菌酶；

所述识别探针的被捕捉序列位于适配子序列的3’端，并且光交联基团位于捕捉探针的3’端，报告基团位于捕捉探针的5’端；或者所述识别探针的被捕捉序列位于适配子序列的5’端，并且光交联基团位于捕捉探针的5’端，报告基团位于捕捉探针的3’端；

所述识别探针的被捕捉序列为5’-ATG TCG CTG TAG-3’；

所述捕捉探针的捕捉序列为5’-CTA CAG CGA CAT-3’；

所述的适配子序列为5’-ATC AGG GCT AAA GAG TGC AGA GTT ACT TAG-3’；

所述捕捉探针的捕捉序列和光交联基团之间具有延长臂序列，延长臂序列为-TTG-(CH₂)₆-，其中-TTG-与捕捉序列相连，-(CH₂)₆-与光交联基团连接；

所述捕捉探针的捕捉序列和报告基团之间具有悬臂序列，所述悬臂序列为-Z-，其中Z为含有m个碱基的序列，m为3-9。

2.如权利要求1所述的双探针，其特征在于，所述识别探针为：5’-ATC AGG GCT AAAGAG TGC AGA GTT ACT TAG ATG TCG CTG TAG-3’。

3.如权利要求1-2任一项所述的双探针，其特征在于，所述悬臂序列中m为6。

4.如权利要求3所述的双探针，其特征在于，所述悬臂序列为TTT TTT。

5.如权利要求1-2任一项所述的双探针，其特征在于，所述捕捉探针为5’-报告基团-TTT TTT CTA CAG CGA CAT TTG-(CH₂)₆-X-光交联基团，X为酰胺键或由叠氮炔点击化学反应所形成的五元环。

6.如权利要求1-2任一项所述的双探针，其特征在于，所述的报告基团选自生物素或荧光化合物。

7.如权利要求6所述的双探针，其特征在于，所述的荧光化合物是荧光素类、罗丹明类、菁染料、二苯乙烯类、萘酰亚胺类、香豆素类、吖啶类或芘类。

8.如权利要求6所述的双探针，其特征在于，所述的荧光化合物为异硫氰酸荧光素、羧基荧光素、四氯荧光素、六氯荧光素、四乙基罗丹明、四甲-6-羧罗丹明、羧基四甲基异硫氰酸酯、四甲基异硫氰酸罗丹明、噻唑橙、Cy3、Cy5、噁唑橙或藻红蛋白。

9.如权利要求1-2任一项所述的双探针，其特征在于，所述的光交联基团是双吖丙啶、二苯甲酮或芳香叠氮类化合物。

10.如权利要求9所述的双探针，其特征在于，所述芳香叠氮类化合物是叠氮苯。

11.如权利要求1-2任一项所述的双探针，其特征在于，所述捕捉探针为5’-荧光化合物-TTT TTT CTA CAG CGA CAT TTG-(CH₂)₆-X-光交联基团，或者5’Biotin-TTT TTT CTACAGCGA CAT TTG-(CH₂)₆-X-光交联基团。