[发明专利]生产生物活性HIV‑1TAT蛋白的方法

权利要求书

1.用于制备生物活性Tat的方法，所述方法包括培养在诱导时能够表达Tat的宿主生物体，并且其中Tat的表达是在所述宿主生物体的对数生长期过程中诱导的。

2.按照权利要求1的方法，其中生物活性的量度是Tat被单核细胞来源的树突细胞摄取的能力。

3.按照前述权利要求中任一项的方法，其中所述宿主生物体容易允许大体积培养。

4.按照前述权利要求中任一项的方法，其中所述宿主生物体是真核细胞。

5.按照权利要求4的方法，其中所述宿主生物体是细菌或酵母。

6.按照权利要求5的方法，其中所述宿主生物体是酿酒酵母(S.cerevisiae)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、或大肠杆菌(E.coli)。

7.按照权利要求6的方法，其中所述宿主生物体是大肠杆菌BL21菌株。

8.按照前述权利要求中任一项的方法，其中由培养的宿主获得的表达产物与本领域中已证明是生物活性的Tat相同，或基本上相同。

9.按照前述权利要求中任一项的方法，其中Tat为SEQ ID NOs.2或3所示，或为其具有生物活性且与所述序列具有至少70％序列同源性的突变体或变体。

10.按照前述权利要求中任一项的方法，其中所述宿主生物体已经使用适当的表达质粒转化。

11.按照前述权利要求中任一项的方法，其中编码Tat的序列处于可诱导启动子的控制下。

12.按照前述权利要求中任一项的方法，其中所述启动子仅被特异性聚合酶识别，所述特异性聚合酶受到可诱导启动子的控制。

13.按照权利要求11或12的方法，其中所述启动子是lac启动子。

14.按照权利要求11-13中任一项的方法，其中所述编码Tat的序列处于T7启动子的控制下。

15.按照权利要求14的方法，其中所述宿主生物体能够表达T7RNA聚合酶，并且其处于lac启动子的控制下。

16.按照前述权利要求中任一项的方法，其中Tat的表达在0.4-0.9范围内、包括端点值的OD处诱导。

17.按照前述权利要求中任一项的方法，其中Tat的表达在0.45-0.8范围内、包括端点值的OD处诱导。

18.按照前述权利要求中任一项的方法，其中Tat的表达在0.5-0.7范围内、包括端点值的OD处诱导。

19.按照前述权利要求中任一项的方法，其中Tat的表达在约为0.6的OD处诱导。

20.按照前述权利要求任一项获得的Tat。

21.用于生产单体Tat的方法，所述方法包括培养在诱导时能够表达Tat的宿主生物体，并且其中Tat的表达是在所述宿主生物体的对数生长期过程中诱导的。