[发明专利]一种用于人FKBPL蛋白的酶联免疫检测及制备方法

权利要求书

1.人FKBPL的单抗包被酶标板的制法，通过下列步骤制备而成：

以BC004168 DNA为模板，PCR扩增FKBPL DNA片段（259nt-966nt）基因片段，与载体PET28a连接，转化BL21，表达大量48 KD FKBPL蛋白片段；

将48 KD FKBPL蛋白免疫小白鼠，取其脾细胞与鼠骨髓瘤细胞融合，选择阳性杂交瘤细胞于鼠腹水中培养，纯化蛋白得到抗FKBPL的单抗；

将所得单抗用pH9.6的碳酸盐缓冲溶液稀释后包被96孔板，100μl/孔，4℃ 16-24小时，PBST洗涤3次，每次30秒，然后除尽孔内液体；

用含8% 小牛血清的pH7.4的PBS封闭，每孔200μl，37℃，2小时，PBST洗涤3次，干燥后密封；该板即为抗FKBPL的单抗包被的酶标板，可用于FKBPL的特异性检测。

2.应用权利要求1所述的人FKBPL的单抗包被酶标板的ELISA检测试剂盒，其特征为：由权利要求1所述的抗FKBPL的单抗包被的酶标板、FKBPL标准品、FKBPL的阳性对照样品、抗FKBPL的多抗、样品稀释液、洗涤液、显色液、终止液构成，具体组分为：（1）酶标板：由FKBPL的单抗包被；（2）样品稀释液：含8% 小牛血清的pH7.4的0.01mol/l PBS；（3）洗涤液：pH7.4PBST；（4）酶标二抗：购自美国R＆D systems的辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标记的羊抗兔IgG；（5）FKBPL标准品：FKBPL的PBS溶液，FKBPL终浓度为10 ng/ml；（6）FKBPL阳性对照样品：FKBPL的PBS溶液，FKBPL终浓度为10 ng/ml；（7）抗FKBPL的多抗：多抗的PBS溶液，多抗的终浓度为1mg/ml；（8）显色液：TMB-H₂O₂系统；（9）终止液：2mol/L H₂SO₄溶液。