[发明专利]二元联合作用藻红外测试的参照浓度分析方法

说明书

本发明公开了一种二元联合作用藻红外测试的参照浓度分析方法，该方法先通过藻温测试、三指标评价方法、联合作用评价方法找出药品的同药倍半关系浓度，然后比较两种药品的同药倍半关系浓度，找出其中同药倍半关系浓度小的药品，以其倍浓度、半浓度分别作为测试用的联合药液、单药液配制的参照浓度，从而确定二元联合作用藻红外测试药液的配制浓度。本发明通过改进的藻温测试方法和三指标评价方法能够保证藻响应温差和藻响应药液评价结果的质量，提出的参照浓度分析方法和二元联合作用评价方法能够有效控制联合作用分析结果的质量，测试结果具有较好的再现性、再现性的重现率和重现性、重现性的重现率。

技术领域

本发明属于化学品毒性检测领域，尤其涉及一种二元联合作用藻红外测试的参照浓度分析方法。

背景技术

建立联合作用藻红外测试技术极为复杂，首先，要解决测试条件、测试藻、藻温测试方法、藻响应药品的评价方法；其次，要解决联合作用评价方法；最后，要解决药液配制的标准、数据处理软件等问题。由于二元联合作用分析是多元联合作用分析的基础，因此，所建立的联合作用藻红外测试方法是否可行，首先要通过二元联合作用的测试分析进行检验。目前，国内外用微生物法测试化学品联合作用的研究主要集中在发光细菌上，如利用发光细菌研究农药的毒性、农药混合物对绿藻和发光细菌的联合毒性、利用发光细菌法测定海水中镉与氨三乙酸的毒性、六种除草剂对发光细菌的短期和长期抑制毒性的比较、六种有机磷农药对发光细菌的混合毒性预测，用藻红外测试化学品毒性的研究有藻红外辐射测试环境重金属急性毒性、藻红外辐射测试环境农药残留急性毒性研究、急性毒性藻红外测试中敏感藻的确定方法、有机毒害物急性毒性与藻红外辐射变化研究、急性毒性藻红外测试中联合作用及藻类慢性毒性实验、藻红外测试多元有机毒物联合毒性研究，关于化学品联合作用藻红外测试方法的研究尚未见报道。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种二元联合作用藻红外测试的参照浓度分析方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种二元联合作用藻红外测试的参照浓度分析方法，包括以下步骤：

(1)藻响应药品浓度梯度的分析

①藻温测试

选择滇池铜绿微囊藻为实验藻，其藻密度≥3.16×10⁹个/L；

藻温测试过程：空白组3重复，对照组3重复，加药组3重复，其中加药组滴加的药液按递减的同药倍半浓度梯度法，依次设计为N、N/2、N/4、N/8、N/16、 N/32六组不同浓度，先在每个测试杯中分别加入5mL藻液，加完后测试每个测试杯的藻温；

然后进行以下加药测试：a、蒸馏水毒性测试时，用滴液管分别滴加蒸馏水 0.05mL于加药组和对照组的测试杯中，待藻温稳定时测试每个测试杯的藻温；b、待测药品的毒性测试时，用滴液管滴加0.05mL蒸馏水于对照组的测试杯中，用滴液管分别滴加0.05mL相应浓度的待测药液于加药组的测试杯中，滴加完后测试每个测试杯的藻温；

②藻温处理

藻响应温差计算方法为：ΔT＝∣ΔT_j∣―∣ΔT_d∣，ΔT＞0

加药组藻温差计算方法为：ΔT_j＝(T_j-ti-T_j-t0)-(T_k-ti-T_k-t0)

对照组藻温差计算方法为：ΔT_d＝(T_d-ti-T_d-t0)-(T_k-ti-T_k-t0)