[发明专利]二元联合作用藻红外测试的参照浓度分析方法

权利要求书

1.二元联合作用藻红外测试的参照浓度分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)藻响应药品浓度梯度的分析

①藻温测试

选择滇池铜绿微囊藻为实验藻，其藻密度≥3.16×10⁹个/L；

藻温测试过程：空白组3重复，对照组3重复，加药组3重复，其中加药组滴加的药液按递减的同药倍半浓度梯度法，依次设计为N、N/2、N/4、N/8、N/16、N/32六组不同浓度，先在每个测试杯中分别加入5mL藻液，加完后测试每个测试杯的藻温；

然后进行以下加药测试：a、蒸馏水毒性测试时，用滴液管分别滴加蒸馏水0.05mL于加药组和对照组的测试杯中，待藻温稳定时测试每个测试杯的藻温；b、待测药品的毒性测试时，用滴液管滴加0.05mL蒸馏水于对照组的测试杯中，用滴液管分别滴加0.05mL相应浓度的待测药液于加药组的测试杯中，滴加完后测试每个测试杯的藻温；

②藻温处理

藻响应温差计算方法为：ΔT＝∣ΔT_j∣―∣ΔT_d∣，ΔT＞0

加药组藻温差计算方法为：ΔT_j＝(T_j-ti-T_j-t0)-(T_k-ti-T_k-t0)

对照组藻温差计算方法为：ΔT_d＝(T_d-ti-T_d-t0)-(T_k-ti-T_k-t0)

式中：T_j-ti—加药后加药组的藻温；T_j-t0—加药前加药组的藻温；T_k-ti—加药后空白组的藻温；T_k-t0—加药前空白组的藻温；T_d-ti—加水后对照组的藻温；T_d-t0—加水前对照组的藻温；j—加药组，滴加药液；d—对照组，滴加蒸馏水；k—空白组，不滴加药液或蒸馏水；t_i—测温遍数，i＝0,为加药前的测温；i＝1,2…n,为加药后第1,2…n遍测温；

③三指标法评价藻对药液的响应

当藻温差数据同时满足下面三个指标时，表示藻对药液有响应：

指标①—最大藻温差比较值，︱ΔT_j-max︱＞︱ΔT_d-max︱；

指标②—平均藻温差比较值，∣Δ〒_j∣＞∣Δ〒_d∣；

指标③—藻响应率(ψ)，∣ΔT_j∣＞∣ΔT_d∣的出现次数≥6；

其中：ΔT_j-max—加药组的最大藻温差，ΔT_d-max—对照组的最大藻温差，Δ〒_j—加药组的平均藻温差，Δ〒_d—对照组的平均藻温差；

通过三指标法找出藻响应药品的浓度范围，如果没有找到藻响应药品的浓度范围，需重新设计药液浓度梯度再测试；

(2)藻响应药品的敏感浓度分析

①同药倍半关系浓度的初步分析

通过步骤(1)中的步骤②和③的方法分析各浓度的藻响应温差，然后找出用于联合作用指数分析的联合药液的最大藻响应温差、单药液的藻响应温差，进行联合作用指数θ计算，根据联合作用评价方法分析同药倍半浓度的相加作用类型，其中，联合作用指数θ的计算式为：

式中：θ—联合作用指数；△T_ABmax—A、B药联合时产生的藻最大响应温差；△T_A—△T_ABmax出现的测温遍数时，A药的藻响应温差；△T_B—△T_ABmax出现的测温遍数时，B药的藻响应温差；

联合作用评价方法为：

θ＞1+f 协同作用

1-f≤θ≤1+f 相加作用

当θ＜1-f时：

△T_ABmax＜max(△T_A、△T_B) 拮抗作用

△T_ABmax＞max(△T_A、△T_B) 独立作用

式中：f＝0.42；

其中，同药倍半关系浓度为同药的倍浓度与半浓度的联合作用为相加作用时的同药倍半浓度；

②同药倍半关系浓度的再现性分析

如果上一步联合作用评价方法分析的同药倍半浓度为相加作用，则进行同药倍半关系浓度的再现性分析，同药倍半关系浓度进行2次再现性分析，如有1次测试结果为相加作用，则同药倍半关系浓度通过再现性分析，通过再现性分析的同药倍半关系浓度即为藻响应药品的敏感浓度；

(3)参照浓度的确定

比较两种药品的同药倍半关系浓度，找出同药倍半关系浓度小的药品，以其倍浓度、半浓度分别作为测试用的联合药液、单药液配制的参照浓度。