[发明专利]一种燕麦花叶病毒的RT‑PCR检测方法、引物和试剂盒在审
| 申请号： | 201710056939.3 | 申请日： | 2017-01-19 |
| 公开（公告）号： | CN107058616A | 公开（公告）日： | 2017-08-18 |
| 发明（设计）人： | 张卫东;黄永辉;权永兵;廖力;徐淼锋;迟远丽 | 申请（专利权）人： | 珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/94 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司44205 | 代理人： | 李先林 |
| 地址： | 519015 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 燕麦 花叶 病毒 rt pcr 检测 方法 引物 试剂盒 | ||
1.一种用于燕麦花叶病毒的RT-PCR检测的引物，包括上游引物OMV-F2、下游引物OMV-R2，其序列分别如下：
OMV-F2：5′-CCTCGGATGGTGCGTCAATA-3′；
OMV-R2：5′-AACCCTGTGGTGGGTTGTTT-3′。
2.一种燕麦花叶病毒的RT-PCR检测方法，其特征在于，包括使用权利要求1所述引物进行PCR扩增的步骤。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、取待测样品提取植物组织总RNA；
S2、以总RNA为模板，引入下游引物OMV-R2进行反转录模板cDNA的合成；
S3、将上游引物OMV-F2、下游引物OMV-R2置于PCR仪中进行PCR扩增反应；
S4、对扩增产物进行电泳分离，鉴定样品中是否含有燕麦花叶病毒。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中进行反转录模板cDNA的合成时，其反应体系为：
总RNA1μL
5×PCR缓冲液 2.5μL
dNTP 0.5μL
下游引物OMV-R2 2μL
反转录酶 0.5μL
加ddH2O至总体系12.5μL；
反应条件为：37℃保温60min，70℃ 15 min灭活反转录酶。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述dNTP的浓度为10mmol/L，所述下游引物OMV-R2的浓度为10μmol/L。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤S3中PCR反应体系为：
10×PCR缓冲液2.5μL
MgCl22.5μL
上游引物OMV-F2 1μL
下游引物OMV-R2 1μL
模板cDNA 1μL
Taq酶0.5μL
加ddH2O补足到25μL；
反应条件为：95℃ 5min；95℃ 1min，60℃ 50s，72℃ 60s，35个循环；72℃ 10min。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述上游引物OMV-F2和下游引物OMV-R2的浓度均为10μmol/L。
8.一种燕麦花叶病毒的RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述的引物。
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