[发明专利]一种使用多内参基因组合研究牦牛胚胎基因的方法在审
| 申请号： | 201710054519.1 | 申请日： | 2017-01-24 |
| 公开（公告）号： | CN106591477A | 公开（公告）日： | 2017-04-26 |
| 发明（设计）人： | 吴晓云;褚敏;丁学智;梁春年;郭宪;王宏博;裴杰;包鹏甲;阎萍 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京中恒高博知识产权代理有限公司11249 | 代理人： | 吕玉博 |
| 地址： | 730000 甘肃省*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 使用 内参 基因 组合 研究 牦牛 胚胎 方法 | ||
1.一种使用多内参基因组合研究牦牛胚胎基因的方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）提取牦牛胚胎组织的总RNA，反转录为cDNA；
（2）使用多个内参基因，分别设计特异性引物进行实时荧光定量PCR反应，得到Ct值；
（3）根据步骤（2）获得的Ct值，用GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件筛选出最稳定的内参基因组合；
（4）将步骤（3）获得的内参基因组合和目的基因一起进行qRT-PCR反应，计算目的基因在各组织中的相对表达量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述多个内参基因为：ACTB、B2M、HPRT1、GAPDH、18SrRNA、28SrRNA、PPIA、UBE2D2、SDHA和TBP。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述实时荧光定量PCR反应体系为：
SYBR Premix Ex TaqTM10µl
上游引物S（20 mmol·L-1） 0.8µl
下游引物A（20 mmol·L-1) 0.8µl
ddH2O 7.4µl
cDNA模板 1µl。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述实时荧光定量PCR反应程序为：95 ℃ 30 s， 95 ℃ 5 s，55℃ 30 s，40个循环后进入溶解曲线程序。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（3）中筛选得到的最稳定的内参基因组合为ACTB和TBP。
6.用于研究牦牛胚胎基因的多内参基因组合，其特征在于：所述多内参基因组合为ACTB和TBP。
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