[发明专利]一种接头和通过高效率环化方式构建测序文库的方法在审
| 申请号： | 201710053745.8 | 申请日： | 2017-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN108342385A | 公开（公告）日： | 2018-07-31 |
| 发明（设计）人： | 李洋;陈祖耕;王萍;廖小平 | 申请（专利权）人： | 中国科学院天津工业生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C40B50/06 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 崔佳佳;马莉华 |
| 地址： | 300308 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 测序文库 环化 方式构建 双链核酸分子 高效率 构建 制备 生物素标记 错误连接 核酸片段 合成成本 接头序列 突出末端 文库片段 长片段 反义链 高通量 正义链 测序 文库 成功 | ||
1.一种接头，其特征在于，所述接头为正义链和反义链形成的具有互补的突出末端的双链核酸分子；其中，所述双链核酸分子上含有生物素标记；
并且所述正义链的序列选自：SEQ ID NO：1；而所述反义链的序列选自下组：SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6。
2.如权利要求1所述的接头，其特征在于，所述双链核酸分子中正义链的5’末端的核苷酸带有磷酸基团。
3.如权利要求1或2所述的接头，其特征在于，所述双链核酸分子中反义链上含有生物素标记。
4.如权利要求1或2所述的接头，其特征在于，所述的反义链为SEQ ID NO.:2。
5.一种如权利要求1所述的接头的制备方法，其特征在于，包括：
(1)分别合成正义链和反义链核酸分子，其中至少一条链上含有生物素标记；和
(2)对所述正义链和反义链核酸分子进行混合后，先变性再退火，形成具有互补的突出末端的双链核酸分子，即权利要求1所述的接头。
6.一种通过环化方式构建DNA高通量测序文库的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提供权利要求1所述接头；
(2)对待测生物的基因组DNA进行片段化处理，获取片段化DNA；
(3)将(1)中接头和(2)中片段化DNA相连，形成片段化DNA两端带有所述接头的分子；
(4)对(3)中片段化DNA两端带有所述接头的分子进行环化处理，使片段化DNA两端的接头的突出末端发生连接，从而形成环形DNA分子；
(5)对(4)中的所述环形DNA分子进行随机打断，形成片段混合物；
(6)从(5)中的所述片段混合物中，分离出带有所述接头的片段，从而构成所述的DNA高通量测序文库。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中在片段化处理之后，还包括对片段化产物的纯化及末端修饰步骤。
8.如权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中环化处理通过控制浓度和时间，不增加DNA分子大小。
9.如权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)中片段混合物中DNA片段的长度为200～600bp。
10.如权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述步骤(6)中用带有链酶亲和素的磁珠筛选带有接头的片段。
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