[发明专利]一种核基质蛋白22的快速检测试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种核基质蛋白22的快速检测试剂盒及其应用。

背景技术

膀胱肿瘤是泌尿系统最常见的肿瘤，90％以上为移行细胞癌，膀胱移行细胞癌(transitional cell carcinoma of bladder)多发生于50-70岁之间，其中80％以上为表浅肿瘤，有10％～20％发展为浸润性膀胱癌。目前对膀胱癌诊断和术后复查的手段主要有膀胱镜和尿细胞学检查，膀胱镜虽准确，但其是一种侵入性检查，操作复杂、费时费力、费用高额，且会增加患者的痛苦，使得很多患者对此方法有抵触情绪，同时其还难以发现原位癌或扁平癌。尿细胞学检查虽无创，且特异性较好，但敏感性低，对于分期较低、分化较好的肿瘤，其敏感性仅为30％或更低，而且受诊断医师主观因素的影响较大。因此，寻找一种简便、无创且能早期诊断膀胱癌的检测方法具有很大意义。

核基质蛋白22(NMP-22)是核基质的重要组成部分，其与DNA的复制、转录及RNA的合成、基因表达的调控有关。NMP-22是核有丝分裂装置蛋白(NuMA)的一个亚单位，NuMA和有丝分裂期间纺锤体的形成有关，其主要功能为协调核有丝分裂期间染色体正确均匀地分配到子代细胞。因此，NMP-22多分布于有丝分裂较活跃的组织，如上皮细胞，尤其是尿路上皮细胞。

现代研究发现，当细胞恶变(malignant transformation)时，核内遗传物质在分裂末期分配极度异常，NMP22的合成激增。膀胱癌患者尿液NMP-22含量升高是由于癌细胞增殖异常活跃使细胞内NMP-22含量增高，在细胞凋亡过程中释放到尿液中所致。NMP-22在尿液中的含量在一定程度上反映了肿瘤细胞的增殖状况。因此，尿液中NMP-22含量可作为筛选膀胱癌的一个肿瘤标志物，对判断疾病的进展及治疗效果评价有重要参考价值。

专利文献CN104330565A在2014年10月24日公开了一种利用抗核基质蛋白22抗体快速检测膀胱癌的免疫层析试纸及其制备方法，该免疫层析试纸包括样品垫1、结合垫2、硝酸纤维素膜3、吸水纸4和底板5；硝酸纤维素膜3在所述底板5的中部，在所述硝酸纤维素膜3沿底板的一端依次为结合垫2、样品垫1，在所述硝酸纤维素膜3沿底板的另一端为吸水纸4；硝酸纤维素膜3包含包被有抗核基质蛋白22抗体的检测区和包被有抗IgG抗体的质控区；检测区设有检测线(T)，质控区设有质控线(C)；结合垫2上包被有胶体金标记的抗核基质蛋白22抗体或乳胶标记的抗核基质蛋白22抗体或胶体硒标记的抗核基质蛋白22抗体。该免疫层析试纸具有使用简便、无创，可作为膀胱癌的临床辅助诊断及病情的检测的优点，但是，该免疫层析试纸的检测准确度和重复性较低，不适合大规模推广和应用。

专利文献CN104267197A在2014年10月24日公开了一种核基质蛋白22化学发光免疫检检测剂盒及其制备方法，所述核基质蛋白22化学发光免疫检检测剂盒包括：1)NMP22校准品；2)NMP22单克隆抗体预包被的固相载体；3)NMP22单克隆抗体的酶标记物；4)与所述酶作用的发光底物液；5)浓缩洗液。该核基质蛋白22化学发光免疫检检测剂盒是一种简便、无创且能早期诊断膀胱癌的试剂盒。但是，该核基质蛋白22化学发光免疫检检测剂盒的稳定性较差，无法满足临床的要求。

因此，研究和开发出一种灵敏性高、特异性好和稳定性高的膀胱癌的检测方法仍是当前亟需解决的难题。

发明内容

为了解决现有技术中的膀胱癌检测试剂盒的不足，本发明目的在于提供一种核基质蛋白22的快速检测试剂盒，以解决上述问题。

本发明提供了一种核基质蛋白22的快速检测试剂盒，由核基质蛋白22单克隆抗体包被的固相载体、辣根过氧化物酶标记核基质蛋白22单克隆抗体、吖啶酯、洗涤液和核基质蛋白22校准品组成。

进一步地，所述核基质蛋白22单克隆抗体包被的固相载体的制备方法为：

将核基质蛋白22单克隆抗体加入pH为4.2的柠檬酸钠缓冲液中制成包被液，所述核基质蛋白22单克隆抗体的添加量是柠檬酸钠缓冲液体积的0.8-1.2％，将所述包被液加入96孔微孔板中，每孔100μL，放置4℃条件下过夜，甩掉包被液，接着每孔加入300μL封闭液，室温放置3-5h，甩掉封闭液，室温除湿干燥24h，即得。

进一步地，所述封闭液由以下组分组成：

柠檬酸钠缓冲液30-50g/L、十四烷基三甲基氯化铵12-16g/L、绿原酸2-4g/L、葛根素0.6-1.2g/L、氯化钠4-6g/L和Proclin300 0.1-0.3g/L，余量为水。