[发明专利]一种抗活化凝血因子V单克隆抗体及其制备方法和用途

说明书

本发明公开了一种抗活化凝血因子V单克隆抗体，其特征在于：其轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，其重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。本发明还公开了前述单克隆单体的制备方法和用途。本发明抗活化凝血因子V单克隆抗体与活化凝血因子V的结合能力强，可用于活化凝血因子V的检测。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗活化凝血因子V单克隆抗体及其制备方法和用途。

背景技术

凝血因子V(factor V，FV)是分子量为333KD的单链糖蛋白，生理情况下几乎以无活性的状态存在于血浆中。在凝血酶的作用下，血浆FV转变为具有凝血活性的活化凝血因子V(ctivated factor V，FVa)。血浆中的FVa是凝血过程中一个重要的辅因子，对凝血过程有着至关重要的调控作用，机制如图1所示。在凝血过程中，FVa与FXa、钙离子及磷脂共同构成凝血酶原复合物，可使凝血酶原的激活效率增加30万倍。FVa又可通过活化的蛋白C(activated protein C,APC)裂解而被灭活，从而通过APC途径直接或间接参与凝血过程。总之，FVa在凝血过程中处于促凝血途径和抗凝血途径的交叉点，对维持凝血平衡起着至关重要的作用。

FV不仅在凝血平衡方面具有重要的作用，而且血浆FV含量、FV活性的高低还与疾病的发生存在相关性。研究表明，体内FV异常，根据产生机制的不同，可导致遗传性FV缺乏症，引起出血；或导致活化蛋白C抵抗(APCR)，引起血栓。另外，血浆凝血因子V活性的测定，还可以作为判断重症肝炎病情和观察其预后的一个有用指标。

但是，目前尚缺乏有效的定量检测活化FV的方法，研制抗活化FV单克隆抗体对于建立特异性强、灵敏度高的FVa活性检测方法，以辅助诊断FV异常疾病意义重大。目前并无抗活化FV单克隆抗体的制备报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗活化凝血因子V单克隆抗体。

本发明抗活化凝血因子V单克隆抗体，其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

本发明编码前述单克隆抗体的基因片段，其轻链可变区的核苷酸序列如SEQ IDNO：1所示，其重链可变区的核苷酸序列SEQ ID NO：2所示。

本发明重组载体，它含有前述基因片段。其中，所述载体是重组pcDNA3.1/ZEO(+)载体。

本发明转基因细胞，它含有前述的重组载体。其中，所述转基因细胞是转基因CHO-K1细胞。

本发明制备前述的单克隆抗体的方法，其特征在于：步骤如下：

(1)取前述的转基因细胞，培养；

(2)取培养液上清，纯化，即可。

其中，所述纯化的方法是采用Hi Trap Protein A亲和层析柱层析纯化。

本发明还提供了前述单克隆抗体在制备检测活化凝血因子V的试剂中的用途。

本发明制备得到了抗活化凝血因子V单克隆抗体，对FVa抗原具有高亲和力，用于分离纯化和检测人源FVa特异性强，可作为检测活化凝血因子V的试剂，用于活化凝血因子V的检测，应用前景良好。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为ELISA法检测噬菌体亲和力结果图。