[发明专利]一种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其是一种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法。

背景技术

银耳( Tremella fuciformls )是一种经济价值高，营养丰富的药食两用菌，具有滋补生津、润肺养胃之功效。银耳多糖是银耳的主要活性成分，具有提高机体免疫能力、降血糖、降血脂、抗衰老、抗溃疡、抗血栓形成、抗突变等作用。目前，银耳多糖的常用提取方法是热水浸提法，但这种传统的提取方法存在着提取率低、耗时、造成了资源浪费等问题。银耳多糖分为胞外多糖和胞壁多糖，胞壁多糖用水很难提取完全，即使是稀酸或稀碱提取法，又由于部分多糖易发生水解，破坏多糖的活性结构，导致多糖损失和提取率减少。

现有在银耳中提取的技术，例如一种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法，该发明涉及一种银耳多糖和银耳蛋白的提取方法，包括：（1）银耳菌的活化培养和发酵培养；（2）超滤膜浓缩和破碎银耳孢子；（3）聚乙二醇/无机盐双水相体系的配制；（4）聚乙二醇/ 无机盐双水相体系提取；（5）冷冻干燥制备银耳多糖；（6）聚乙二醇/ 无机盐双水相体系二次提取，超滤膜过滤，冷冻干燥制备银耳蛋白。该发明可以实现银耳孢子生产和多糖提取的连续化、规模化，便于银耳多糖的工业化生产；得到的产物中既有银耳孢子的胞内多糖，又有银耳孢子液体发酵产生的胞外多糖，极大提高了银耳多糖的产率；并且使银耳多糖和蛋白质得到同时分离，避免了现有sevag 法去除蛋白质的复杂操作和机溶剂污染的弊端，提高了多糖的纯度。

该发明的这种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法，提取较为复杂，提取时间久，且提取的银耳多糖和银耳蛋白相对纯度较差。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种提高多糖提取效率，产量高，提高提取纯度，提取简便的提取银耳多糖和银耳蛋白的方法。

为解决上述现有的技术问题，本发明采用如下方案：一种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法，包括以下制备步骤：

1）选取银耳用清水清洗，微波干燥15-23min，粉碎至100-150目，得银耳粉末；

2）在银耳粉末中加入1.2-1.7倍的乙醇乙醚混合液，回流1-3h后过滤取滤渣；

3）在滤渣中加入2-3倍的清水，搅拌，超声波助溶浸泡，再加入氢氧化钠浓度1-2%的氢氧化钠水溶液调节pH值至10-11后浸泡，回流浸提2-3次，合并得浸提液；

4）在浸提液中加入饱和度为95-98%的乙醇，搅拌，浸泡，得沉淀物；

5）在沉淀物中加入去离子水和0.01-0.02%的助滤剂后超滤膜浓缩，干燥，得银耳多糖；

6）在银耳多糖中加入2-3倍的蒸馏水，依次加入氯仿和正丁醇，振摇20-35min，离心，取水层和溶液层交界处的液体，超滤膜浓缩，干燥，得银耳蛋白。

作为优选，步骤2中乙醇乙醚混合液中乙醇与乙醚的比例:1-1.2：1，加入乙醇乙醚混合液时温度加热至52-61℃，使银耳在乙醇乙醚中有效的脱脂，为提高提取多糖和蛋白提供便捷。

作为优选，步骤3中加入氢氧化钠水溶液浸泡时还需加入复合酶，酶解1-2.3h，后灭酶10-17min，采用复合酶将液浸泡成分酶解，通过复合酶破坏细胞壁，提高提取多糖和蛋白的纯度。

作为优选，复合酶为纤维素酶和果胶酶按1：3-4.6的比例混合而成，按一定的比例调节使用酶，提高酶解质量和酶解效率。

作为优选，步骤5中助滤剂的成分及其重量份为：蒙脱石4-10份,六偏磷酸钠0.1～0.5份,碳酸钠4.2～6.3份,硅溶胶5～8.4份,氢氧化铝1.8～2.2份，玛雅蓝0.01-0.02份、硫氰酸胍0.02-0.04份，通过助滤剂将不需要的杂质充分吸附，提高提取纯度。

作为优选，步骤5中超滤膜浓缩时采用截留分子量为3000～6000Dal的超滤膜浓缩，干燥方式为冷冻干燥，干燥时有效的保护多糖的组织，提高提取多糖的功效。

作为优选，步骤6中银耳多糖溶于蒸馏水后还需加入0.02-0.04%的蛋白酶抑制剂，防止在提取蛋白时蛋白降解，保证提取蛋白的纯度。

作为优选，步骤6中氯仿的加入量为银耳多糖溶液的20-30%，正丁醇的加入量为氯仿溶液的25-38%。

作为优选，步骤6中超滤膜浓缩时采用截留分子量为6000～10000Dal的超滤膜浓缩，干燥方式为冷冻干燥。