[发明专利]一种高菌量乳酸菌制剂及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及水产养殖，尤其是涉及一种高菌量乳酸菌制剂及其制备方法与应用。

背景技术

在水产养殖中，微生态制剂作为抗生素的替代品，一方面通过有益微生物降解养殖环境的氨氮、亚硝酸盐、硫化氢、饵料残渣、粪便排泄物等净化水质，为养殖动物营造一个良好的水体环境，防止病原菌滋生；另一方面，通过有益微生物产生代谢产物和活性物质如有机酸、抗菌肽等来抑制或者杀灭病原菌，同时提高养殖动物免疫力和抵抗力，达到防治病害的目的；再者有益微生物通过产生多种消化酶，帮助蛋白质、碳水化合物、脂肪代谢、提高饲料的利用率和转化率，达到减少资源消耗和增产的目的。

乳酸菌作为常见微生态益生菌的一种，可通过大量产生有机酸、酶、细菌素等生物活性物质抑制病原菌的繁殖与定植，可维持养殖动物肠道内微生态平衡与正常的生理功能。乳酸菌是定植在动物肠道内的有益菌群，以乳酸菌为代表的专性厌氧菌群是构成定植抗力的主要力量(定植抗力指宿主对致病菌和潜在致病菌在正常微生物群中繁殖和定植的阻抗力)。乳酸菌产生的细菌素是一类具有抑菌活性的多肽或者蛋白类物质，部分细菌素的抑菌谱较广，对多种革兰氏阳性菌有较强的抑制作用。本发明所述乳酸菌制剂对于促进水产养殖动物生长，提高免疫力和抗病力，防治病害尤其是弧菌类病原体造成的病害方面有显著作用。

乳酸菌在发酵过程中由于代谢产物乳酸及其他有机酸累积对其自身细胞生长的抑制作用，单位活菌量与其他益生菌如芽孢杆菌等相比较较低，一般条件下仅能达到芽孢杆菌的30％左右，对于乳酸菌制剂的实际应用造成很大的制约，因而可通过降低上述抑制作用的影响，延长乳酸菌的对数生长期，从而获得较高浓度的乳酸菌制剂。

目前市场上与水产养殖相关的乳酸菌类制剂发酵主要采取两种方式，一种为常规厌氧培养，如多数EM菌剂，此类培养方法得到的发酵产物中乳酸菌含量较低，一般低于5×10⁸CFU/mL，无法满足大规模水产养殖中的需求；另一种为高密度发酵培养，采取流加氨水或NaOH、KOH等方式控制发酵液pH，最后以离心方式浓缩乳酸菌发酵液，此类培养方法得到的发酵产物中乳酸菌含量一般高于10¹¹CFU/mL，但对设备要求较高且操作复杂，发酵成本较高，限制了在大规模水产养殖中的应用。

本申请人在中国专利CN103497906A中公开一种微生态制剂及其制备方法与应用，涉及水产养殖。微生态制剂含有枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌中的至少一种和植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌中的至少一种；

植物乳杆菌包括：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)1A07806，保藏编号CCTCC NO:M 2013293；

嗜酸乳杆菌包括：嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)PL7，保藏编号CCTCC NO:M 2013294。

在制备促进对虾或石斑鱼生长，提高对虾或石斑鱼免疫力和抗病力，防治病害，提高存活率，净化养殖水质制剂中应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种高菌量乳酸菌制剂及其制备方法。

本发明的另一目的是提供一种高菌量乳酸菌制剂的应用。

所述高菌量乳酸菌制剂含有植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌等中的至少一种；所述植物乳杆菌含量占总菌数百分比50％～60％；所述嗜酸乳杆菌含量占总菌数百分比40％～50％；总量为100％。

所述植物乳杆菌包括植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)1A07806；

所述嗜酸乳杆菌包括嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)PL7；

所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)1A07806的保藏编号为CCTCC NO：M2013293；

所述嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)PL7的保藏编号为CCTCC NO：M2013294。

所述高菌量乳酸菌制剂中，植物乳杆菌发酵液和嗜酸乳杆菌发酵液均按照本领域常规的深层液体发酵培养的方式获得，经过平板活化、一级种子培养、二级种子培养和发酵培养。具体可以通过以下方法制备得到：

植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌的培养：

将出发菌株按平板活化、液体种子、液体发酵的顺序培养，平板和种子培养基为常规MRS培养基。