[发明专利]一种快速检测蜡样芽孢杆菌的测试片及其制备方法、检测方法

说明书

技术领域

本发明属于快速检测领域，涉及微生物检测技术，具体涉及一种快速检测蜡样芽孢杆菌的测试片，以及该测试片制备方法、检测方法。

背景技术

蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)在自然界分布广泛，在各种食品中的检出率也较高，造成这个现象的原因，往往是由于食品在食用前保存温度不当，放置时间过长，使污染在食品中的蜡样芽孢杆菌或残存的芽孢得以生长繁殖，由于蜡样芽孢杆菌会产生的热稳定毒素，从而会导致食物中毒事件发生。蜡样芽孢杆菌中毒的发病率较高，一般能达到60％～100％。国家质量监督检验检疫总局2014年已通过《食品微生物含量指引》，指出每克即食食品含超过十万个蜡样芽孢杆菌，就不宜供人食用，可能危害食用者的健康。

目前食品中蜡样芽孢杆菌的检测，主要采用国标《GB 4789.14-2014食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》的方法进行检测，该方法为平板法，是经典的微生物检测和鉴定方法，检测结果具有准确可靠的特点，但是该方法耗时长，需要现配置培养基，操作步骤繁琐，难以满足快速检测的实际需求。

纸片法的出现，弥补了平板法的缺点，逐步成为微生物检测和鉴定的主要方法和标准,2007年，Petrifilm^TM测试片被正式列为中国出入境检验检疫行业标准，该方法正逐渐被越来越多的食品生产加工企业及各类检测机构所认可。目前市场上现有测试片的培养基载体为无纺布，其存在目标菌落在无纺布上扩散生长使菌落边缘模糊的缺点，对结果判读有影响。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种快速检测蜡样芽孢杆菌的测试片及其制备方法、检测方法。

技术方案：

一种快速检测蜡样芽孢杆菌的测试片，包括下层底板4，珍珠纸2，上层薄膜组件1和蜡样芽孢杆菌特征显色液体培养基，所述珍珠纸2中间具有圆形凹槽3，所述圆形凹槽3内均匀分布有蜡样芽孢杆菌特征显色液体培养基。

进一步蜡样芽孢杆菌特征显色液体培养基每100mL含有胰蛋白胨0.8～2.0g、牛肉浸出粉0.05～0.5g、氯化钠0.1～1.0g、磷酸二氢钾0.2～0.4g、磷酸氢二钾0.2～0.4g、冷水可溶性胶0.5～2.0g、抑菌剂混合物100～500IU/mL、显色酶解底物混合剂0.015～0.04g。

进一步显色酶解底物混合剂由5-溴-6-氯-3-吲哚辛酯、5-溴-6-氯-3-吲哚基-D-葡糖苷酸环己胺盐、4-甲基伞型酮-beta-D-葡糖苷酸、5-溴-4-氯-3-吲哚基-beta-D-葡糖苷酸环己胺盐按重量比1:1:1:2混合组成。

进一步抑菌剂混合物为多粘菌素B、卡那霉素，头孢克洛按重量比为2:2:1的混合物。

进一步珍珠纸圆形凹槽3直径为50～65mm。

进一步测试片上层薄膜组件1上方粘贴有测试片标签5。

本发明的另一个目的还提供了一种快速检测蜡样芽孢杆菌的测试片的制备方法，包括如下步骤：

a.配制蜡样芽孢杆菌特征显色液体培养基：每100mL按照以下方式配制，称量胰蛋白胨0.8～2.0g、牛肉浸出粉0.05～0.5g、氯化钠0.1～1.0g、磷酸二氢钾0.2～0.4g、磷酸氢二钾0.2～0.4g、冷水可溶性胶0.5～2.0g，于烧杯中加蒸馏水100mL加热搅拌溶解，在121℃高压灭菌锅条件下灭菌15min，冷却至室温后，依次加入经过滤灭菌的抑菌剂混合物10000～50000IU及显色酶解底物混合剂0.015～0.04g，得到蜡样芽孢杆菌特征显色液体培养基，在0～4℃下冷藏备用；

b.各组件的前处理

上层薄膜组件1：在上层薄膜组件1的反面均匀敷上冷水可溶性凝胶，在正面贴上测试片标签5，送辐照处理，辐照剂量为2KGy，使用前紫外灭菌30min；

下层底板4和珍珠纸2：下层底板4与珍珠纸2采用不干胶粘贴贴合在一起后，送辐照处理，辐照剂量为2KGy，使用前紫外灭菌30min；

c.蜡样芽孢杆菌特征显色液体培养基添加：将步骤b中经紫外灭菌后的下层底板4和珍珠纸2结合部件水平放置在水平台面上，珍珠纸2中间圆形凹槽3开口向上，吸取1～3mL蜡样芽孢杆菌特征显色液体培养基添加于圆形凹槽3内，使培养基均匀分布，无菌条件下35～85℃烘干4h后，置于0～4℃的无菌冷藏箱内，备用；

d.组装测试片：将经上述步骤c后得到的测试片组件上贴上经步骤a处理后的上层薄膜组件1，具有测试片标签5的一面向上，即得到快速检测蜡样芽孢杆菌的测试片。