[发明专利]一种快速检测细菌菌落总数的测试皿及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于快速检测领域，涉及微生物检测技术，具体涉及一种快速检测细菌菌落总数的测试皿，以及该测试皿制备方法。

背景技术

细菌广泛存在于空气、水和土壤中，是主要卫生菌指标之一，有些细菌对人体有害，会刺激人体消化道、胃部等，严重的还可对肝脏造成损伤，造成食物中毒，危及生命安全。对于细菌菌落总数现行检测技术主要采用《GB 4789.2-2010食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》，该方法为平板法，具有检测结果准确可靠的特点，是经典的微生物检测和鉴定方法，然而该方法耗时长，需要现配置培养基，操作步骤繁琐，难以满足快检的实际要求。

纸片法的出现，弥补了平板法的缺点，逐步成为微生物检测和鉴定的主要方法和标准,2007年，Petrifilm^TM测试片被正式列为中国出入境检验检疫行业标准，该方法正逐渐被越来越多的食品生产加工企业及各类检测机构所认可。3M创新有限公司公开了一项公告号为CN102985554B，名称为快速检测微生物的装置的发明专利，该装置的使用依赖于待测样品的涂布和盖膜操作，引入了因人为操作不当，导致判读结果有误的可能。

发明内容

为了弥补现有技术的不足及满足实际检测的需要，本发明提供了一种快速检测细菌菌落总数的测试皿及测试皿的制备方法。

技术方案：

快速检测细菌菌落总数的测试皿，包括无菌培养皿和测试片，所述测试片平铺于无菌培养皿底部，所述测试片上添加有细菌菌落特征显色液体培养基，所述细菌菌落特征显色液体培养基每100mL含有胰蛋白胨0.8～2.0g、酵母粉0.4～0.8g、葡萄糖1.0～4.0g、磷酸氢二钾0.05～0.1g、氯化钠0.05～0.2g、磷酸二氢钾0.2～0.4g、硫酸镁0.2～0.4g、显色酶解底物混合剂0.015～0.04g。

所述显色酶解底物混合剂由2,3,5-氯化三苯基四氮唑与NBT按1～2:1比例溶解于N,N-二甲基甲酰胺得到的。

所述测试片是直径为50～70mm的无纺布。

所述无菌培养皿是单次使用的培养皿。

本发明的另一个目的还提供了一种快速检测细菌菌落总数的测试皿的制备方法，其包括如下步骤：

a.配制细菌菌落特征显色液体培养基：每100mL按照以下方式配制，称量胰蛋白胨0.8～2.0g、酵母粉0.4～0.8g、葡萄糖1.0～4.0g、磷酸氢二钾0.05～0.1g、氯化钠0.05～0.2g、磷酸二氢钾0.2～0.4g、硫酸镁0.2～0.4g，于烧杯中加蒸馏水100mL加热搅拌溶解，在121℃高压灭菌锅条件下灭菌15min，冷却至室温后，加入经过滤灭菌的显色酶解底物混合剂0.015～0.04g，得到细菌菌落特征显色液体培养基，在0～4℃下冷藏备用；

b.各组件的前处理

测试片的前处理：辐照剂量为2KGy；

无菌培养皿的前处理：辐照剂量为2KGy；

c.测试皿的制备

将经步骤b处理后的测试片平铺于无菌培养皿的底部后，置于平面超净工作台上，用紫外线照射30min，然后将步骤a的得到的细菌菌落特征显色液体培养基均匀添加于测试片上，于35～95℃烤制4h后，盖上无菌培养皿上盖，得到快速检测细菌菌落总数的测试皿，置于抽真空铝箔包装袋中。

本发明快速检测细菌菌落总数的测试皿在现有纸片法检测的基础上，利用微生物生化反应的特性，将微生物胞内酶的种类及反应条件作为微生物分类鉴定的主要依据，通过在分离培养基或选择性培养基中，加入微生物特异性酶显色底物，当目的菌在培养基上生长时，其特异性酶就能降解显色底物，并产生带有特殊颜色的代谢物，使菌落形成特定的颜色或形态，从而进行样品中微生物的培养和检测。本发明采用培养皿和无纺布为载体，进行细菌菌落总数培养、检测，菌落清晰可见，易于判读和分析，检测准确度达国标90％以上，能够满足实际检测需求。

有益效果：

1.通过培养基优化，获得一种适用于细菌菌落总数生长的培养基；以透气性好、吸附性强、大小合适的无纺布材料作为培养基的载体，通过无纺布的前处理，培养基的吸附及烘干，将培养基附着在测试片上；通过将待测样品直接接种于测试片上，实现对待测样品中细菌菌落总数的快速培养和检测。