[发明专利]一种鉴定苹果上三种葡萄座腔菌的分子生物学方法在审
| 申请号： | 201710046559.1 | 申请日： | 2017-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN106701970A | 公开（公告）日： | 2017-05-24 |
| 发明（设计）人： | 李彬;沈宏;李艳华;陈战;张宇;杨静;粟寒;吴翠萍 | 申请（专利权）人： | 江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心;南京农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/645 |
| 代理公司： | 南京汇盛专利商标事务所(普通合伙)32238 | 代理人： | 袁静 |
| 地址： | 210000 江苏省南京*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴定 苹果 上三种 葡萄 座腔菌 分子生物学 方法 | ||
1.一种鉴定苹果上三种葡萄座腔菌的分子生物学方法，包括以属于葡萄座腔菌属（Botryosphaeria. Sp）的待检菌株DNA为模板，采用引物EF1-S和EF1-A进行PCR扩增的步骤；若扩增产物仅含有230-250bp的DNA片段，则待检菌株为葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）；若扩增产物仅含有140-160bp的DNA片段，则待检菌株为苹果壳色单隔孢溃疡病菌（Botryosphaeria stevensii）；若扩增产物仅含有170-180bp的DNA片段，则待检菌株为钝葡萄座腔菌（Botryosphaeria obtusa）；所述引物EF1-S和EF1-A的序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。
2.根据权利要求1所述鉴定苹果上三种葡萄座腔菌的分子生物学方法，其特征在于所述PCR扩增体系含有2 ×TaqDNA聚合酶缓冲液 12.5μL、引物EF1-S 0.5μL、引物EF1-A 0.5μL、待检菌株DNA 1μL和无菌双蒸水 10.5μL。
3.根据权利要求2所述鉴定苹果上三种葡萄座腔菌的分子生物学方法，其特征在于所述PCR扩增程序如下：94℃预变性5min；94℃变性30s，48℃复性30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃延伸10min。
4.根据权利要求1-3之一所述鉴定苹果上三种葡萄座腔菌的分子生物学方法，其特征在于以待检菌株的DNA为模板，采用ITS基因片段的通用引物ITS-F和ITS-R鉴别待检菌株是否属于葡萄座腔菌属（Botryosphaeria. Sp），所述引物ITS-F和ITS-R的序列分别如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。
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