[发明专利]一种提高枯草芽孢杆菌腈水合酶活性的发酵培养基及应用

权利要求书

1.一种提高枯草芽孢杆菌腈水合酶活性的发酵培养基，其特征在于，该发酵培养基成分为：葡萄糖1～5g/v％、诱导剂IND 0.5～5ml/L、KH₂PO₄ 0.01～1g/v％、K₂HPO₄·3H₂O 0.01～1g/v％、MgSO₄·7H₂O 0.01～0.05g/v％、谷氨酸0.05～1g/v％、脲0.01～1g/v％、NH₄Cl 0.1～1g/v％、酵母浸粉0.1～1g/v％、Tween-80 0.1～1g/v％。

2.根据权利要求1所述的一种提高枯草芽孢杆菌腈水合酶活性的发酵培养基，其特征在于，所述的葡萄糖浓度为100～500g/L。

3.根据权利要求1所述的一种提高枯草芽孢杆菌腈水合酶活性的发酵培养基，其特征在于，所述的诱导剂IND浓度为5～20ml/L。

4.根据权利要求1所述的一种提高枯草芽孢杆菌腈水合酶活性的发酵培养基，其特征在于，发酵培养基成分为：葡萄糖5g/v％、诱导剂IND 5ml/L、KH₂PO₄ 0.4g/v％、K₂HPO₄·3H₂O 0.2g/v％、MgSO₄·7H₂O 0.05g/v％、谷氨酸0.8g/v％、尿素0.6g/v％、NH₄Cl 0.5g/v％、酵母浸粉0.5g/v％、Tween-80 0.5g/v％，pH控制为6.8～7.5，121℃灭菌10-30min。

5.一种提高枯草芽孢杆菌腈水合酶活性的发酵培养基的应用，其特征在于，该培养基用于枯草芽孢杆菌的发酵培养，在5L发酵罐中加入2～4L如权利要求1所述的发酵培养基，121℃实罐消毒10～30min，以5～15％的接种量将200～400ml种子液转入发酵罐内，在通气量1～3vvm、罐压0.01～0.1Mpa、搅拌转速100～300rpm、温度25～35℃的条件下，发酵周期72～120h左右；培养过程中，每隔2～5h取样，测定菌体生长量、发酵液pH变化、葡萄糖含量以及酶活变化情况；控制pH值在6.8～7.5，通过补加葡萄糖-Co²⁺耦合溶液使其浓度保持在3～5g/L之间，当酶活出现降低时结束培养，收获菌体待用。

6.根据权利要求5所述的一种提高枯草芽孢杆菌腈水合酶活性的发酵培养基的应用，其特征在于，在发酵培养过程中采用葡萄糖-Co²⁺耦合补加工艺，添加葡萄糖和诱导剂IND二者配成的补料。

7.根据权利要求5所述的一种提高枯草芽孢杆菌腈水合酶活性的发酵培养基的应用，其特征在于，在发酵过程中需要控制细菌生长环境：通过添加氨水将pH控制在6.8～7.5，温度控制在25～35℃，通氧量保持1～3vvm。