[发明专利]利用生物反应器进行多肉植物繁殖的方法

说明书

本发明公开了一种利用生物反应器进行多肉植物繁殖的方法，包括如下步骤：(1)外植体灭菌及诱导：取外植体消毒灭菌后接种于诱导培养基中，诱导产生胚性愈伤组织；(2)生物反应器增殖：将胚性愈伤组织接种于添加有液体增殖培养基的生物反应器中，暗光培养2～4个周期，获得大量胚性材料；(3)干燥与萌发：将胚性材料置于无菌条件下，经干燥、脱水后，置于无菌干燥瓶中继续培养1‑2个月；然后接种于萌发培养基中，形成正常丛生芽；(4)壮苗与移栽：将正常丛生芽接种于壮苗培养基中，培养成可移栽的丛生苗，进行移栽即可。采用本发明步骤进行多肉植物的繁殖，可有效地避免多肉植物组织培养过程中常见的玻璃化和生长速度缓慢等问题。

技术领域

本发明涉及植物扩繁技术领域，具体涉及一种利用生物反应器进行多肉植物繁殖的方法。

背景技术

多肉植物又称多浆植物、肉质植物，是指在植物营养器官中至少有一器官具有发达的薄壁组织以储藏水分，外型比一般植物显得肥厚、膨大和多汁。2012年根据瑞士国际多肉植物协会专家的统计，多肉植物隶属于83科、690属，约12500种。我国常见栽培的有60余科，逾万种。多肉植物最早风靡于日本、韩国等东亚国家，目前在这些国家已经形成了完整的、较成熟的培育筛选产业。近年来，国内多肉植物市场还在持续不断升温，但在多肉植物的科研领域还处于初级阶段，大部分集中在引种驯化阶段，也有人开始了组培、育种等方面的研究。北京、上海、厦门、天津等地的一些植物园和经营者在多肉植物的科研方面走在了前列，尚未形成技术优势，无法与国外的多肉产品相抗衡。目前，虽然有部分企业陆续开始通过组织培养途径开展多肉植物的快速繁殖，但是受困于多肉植物材料易玻璃化和生长速度缓慢等技术难题，无法建立组织培养体系。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种利用生物反应器进行多肉植物繁殖的方法，有效地避免了多肉植物组织培养过程中常见的玻璃化和生长速度缓慢等问题。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

利用生物反应器进行多肉植物繁殖的方法，包括如下步骤：

（1）外植体灭菌及诱导

取外植体消毒灭菌后接种于诱导培养基中，诱导产生胚性愈伤组织，该胚性愈伤组织多为玻璃化状态；

其中，诱导培养基的组成为：MS培养基+BA 0.5~2mg·L^-1+琼脂7g·L^-1+蔗糖30g·L^-1，PH值为5.8；

（2）生物反应器增殖

将诱导产生的胚性愈伤组织接种于添加有液体增殖培养基的生物反应器中，暗光培养2~4个周期，获得大量胚性材料；

其中，暗光培养2个周期，获得大量嫩绿色胚性材料，该嫩绿色胚性材料有较明显的枝叶结构；或

暗光培养3~4个周期，获得大量无色透亮胚性材料，该无色透亮胚性材料枝叶膨大成团状；

其中，液体增殖培养基的组成为：MS培养基+BA 0.5~2mg·L^-1+NAA 0~0.5mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1，PH值为5.8；

（3）干燥与萌发

将步骤（2）获得的嫩绿色胚性材料置于无菌条件下，用干燥、无菌气流脱水4-8h，然后置于光照条件下，于无菌干燥瓶中继续脱水培养1-2个月；当脱水培养的胚性材料略显萎蔫时，将其接种于萌发培养基中，1-2个月后形成正常丛生芽；或

将步骤（2）获得的无色透亮胚性材料置于无菌条件下，用干燥、无菌气流脱水4-8h，然后置于光照条件下，于无菌干燥瓶中继续脱水培养1-2个月；所述无色透亮胚性材料逐渐形成内部中空的丛生体细胞胚胎；将所述内部中空的丛生体细胞胚胎接种于萌发培养基中，1-2个月后形成正常丛生芽；